純水中影響膠體金制備的因素分析

 免疫膠體金技術(shù)(Immune colloidal gold technique) 是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。免疫膠體金技術(shù)以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、低成本、高效率等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧業(yè)、環(huán)境及食品檢測(cè)等領(lǐng)域。

免疫膠體金技術(shù)檢測(cè)原理

  免疫膠體金技術(shù)的反應(yīng)過程是一個(gè)由金顆粒、抗原與抗體動(dòng)態(tài)結(jié)合的反應(yīng)過程,在這個(gè)過程中很多因素影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，如：膜、結(jié)合墊等耗材的孔徑大小影響標(biāo)記物的流動(dòng)速率；標(biāo)記蛋白、T線和C線的抗原或者抗體的純度和濃度直接影響金標(biāo)探針的質(zhì)量；PH和環(huán)境條件影響檢測(cè)靈敏度。
制備高質(zhì)量膠體金時(shí)純水使用的注意事項(xiàng)
（1）玻璃器皿必須徹底清洗，最好是經(jīng)過硅化處理的玻璃器皿，或用第一次配制的膠體金穩(wěn)定的玻璃器皿，再用超純水沖洗后使用。
（2）試劑配制必須保持嚴(yán)格的純凈，所有試劑都必須使用超純水配制，或者在臨用前將配好的試劑經(jīng)超濾或微孔濾膜（0.22 µm）過濾。
（3）配制膠體金溶液的pH以中性（pH7.2）較好。
純水中影響膠體金質(zhì)量的因素：
1.水中的離子雜質(zhì)會(huì)改變pH值及離子強(qiáng)度
pH值對(duì)膠體金顆粒大小和蛋白吸附能力有一定的影響。只有在pH接近和稍高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，膠體金蛋白質(zhì)的吸附力最強(qiáng)；pH過高過低都不利于膠體金的標(biāo)記。溶液的顏色也與pH值相關(guān)聯(lián)。離子強(qiáng)度影響膠體金與蛋白質(zhì)的成功結(jié)合，或?qū)е履z體金粒子的凝聚，降低膠體金的檢測(cè)能力。
2.有機(jī)物除了可能改變pH值外，還會(huì)與蛋白質(zhì)形成結(jié)合體。
有機(jī)物會(huì)影響生物大分子與金顆粒結(jié)合和活化后金顆粒的穩(wěn)定性，干擾蛋白-金復(fù)合體的形成，使其不穩(wěn)定或者容易失活，不能獲得預(yù)期大小的金顆粒，最終影響探針的靈敏度。
3.顆粒會(huì)干擾膠體金顆粒的生成。
如果金顆粒的形狀不規(guī)則或粒徑不均一，使得膠體金標(biāo)記物容易解離和沉淀而產(chǎn)生金標(biāo)擴(kuò)散不完全、反應(yīng)區(qū)底色過深和假陽(yáng)性現(xiàn)象。
4.微生物產(chǎn)生的雜質(zhì)影響膠體金的制備
微生物產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物和死亡時(shí)的細(xì)胞裂解物，諸如顆粒，有機(jī)物，離子等各種雜質(zhì)，也會(huì)影響膠體金的制備。

膠體金檢測(cè)結(jié)果圖

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