培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動(dòng)物（或組織）生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。
培養(yǎng)基種類很多，根據(jù)配制原料的來(lái)源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基；根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等；根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測(cè)試并調(diào)節(jié) pH，還須進(jìn)行滅菌，通常有高溫滅菌和過(guò)濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置，現(xiàn)配現(xiàn)用。

培養(yǎng)基制備過(guò)程

1.配料
配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。

2.溶解
淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀。加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度
95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調(diào) PH
用 1N 的鹽酸或 1N 的 NaOH 把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。

4.過(guò)濾
濾紙或棉花進(jìn)行過(guò)濾。（有時(shí)可以省去） [4]

5.分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

(1)三角瓶
若作靜置培養(yǎng)，則 100ml 培養(yǎng)基/250ml 的三角瓶，zui多不能超過(guò) 150ml 培養(yǎng)基/250ml 的
三角瓶，否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養(yǎng)，則 15-20ml 培養(yǎng)基/250ml 的
三角瓶，保證通氣良好。

(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝 4-5ml，約試管的 1/4 高度；
固體斜面培養(yǎng)基一般裝 3-4ml，約試管的 1/5 高度。

6.包扎
分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。

7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞，培養(yǎng)
基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。

8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個(gè)斜面，約占試管長(zhǎng)度的 1/2。

9.貯存
培養(yǎng)基在 30℃下放置一天，無(wú)污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于 2-8℃冰箱中備用

培養(yǎng)基配制好后為什么必須立即滅菌？
大家都知道，培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類型，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實(shí)驗(yàn)和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異。為了達(dá)到實(shí)驗(yàn)和研究的目的，要按照培養(yǎng)基的配方進(jìn)行配制。而任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌，以備純 培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。發(fā)酵過(guò)程中，培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個(gè)原因：如不滅菌，會(huì)使生物反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物，因雜菌的消耗而損失，造成生產(chǎn)能力的下降;雜菌也會(huì)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，這 就使產(chǎn)物的提取更加困難，造成得率降低，產(chǎn)品質(zhì)量下降;雜菌大量繁殖后，會(huì)改變反應(yīng)液的 pH 值，使反應(yīng)異常;有些雜菌會(huì)分解產(chǎn)物，使生產(chǎn)失敗;如果發(fā)生噬 菌體污染，生產(chǎn)菌細(xì)胞將被裂解，使生產(chǎn)失敗。培養(yǎng)基滅菌是殺滅培養(yǎng)基中本身的原著菌或在空氣中附著的雜菌,更好的讓目標(biāo)菌生長(zhǎng)(減少雜菌消耗培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)，而且有些雜菌會(huì)抑制你目標(biāo)菌的生長(zhǎng))。一般人工培養(yǎng)菌基本上是盡可能讓其生長(zhǎng)快速或者產(chǎn)生代謝產(chǎn)物,因此就讓其在培養(yǎng)基上生長(zhǎng),以減少培養(yǎng)時(shí)間與提高經(jīng)濟(jì)效益。

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