Sapphire與生命活動(dòng)大事件-錯(cuò)配修復(fù)

【導(dǎo)讀】
錯(cuò)配修復(fù)（mismatch repair，MMR）：在含有錯(cuò)配堿基的DNA分子中，使正常核苷酸序列恢復(fù)的修復(fù)方式；主要用來(lái)糾正DNA雙螺旋上錯(cuò)配的堿基對(duì)。錯(cuò)配修復(fù)的過(guò)程需要區(qū)分母鏈和子鏈，做到只切除子鏈上錯(cuò)誤的核苷酸，而不會(huì)切除母鏈上本來(lái)就正常的核苷酸，屬于復(fù)制時(shí)修復(fù)。

【背景知識(shí)】
原核生物比如大腸桿菌的錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)是由Mut基因編碼的Mut S，Mut H和Mut L蛋白構(gòu)成，其中Mut S和Mut L會(huì)形成四聚體Mut SL，在DNA上滑動(dòng)，如果遇到堿基對(duì)錯(cuò)配引起的隆起，就會(huì)停留，開(kāi)始把兩邊的DNA雙鏈拉扯，成環(huán)，直到識(shí)別到GATC序列，如果A的N6發(fā)生甲基化，說(shuō)明是母鏈，不切除，而如果GATC的A沒(méi)有甲基化，說(shuō)明是子鏈，Mut H就會(huì)結(jié)合在Mut SL上。Mut H有核酸內(nèi)切酶活性，在GATC序列的5’端，也就是G的左邊切開(kāi)，再由DNase I發(fā)揮外切酶活性，把Mut SL四聚體擰出的環(huán)全部切除，再由DNA POL III和DNA連接酶重新填補(bǔ)。 歷史重構(gòu)研究指出大腸桿菌使用EcMutS，EcMutL，EcMutH，EcUvrD，EcSSB和四個(gè)ssDNA核酸外切酶之一來(lái)實(shí)現(xiàn)切除。最近，中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所有了新的發(fā)現(xiàn)。 研究指出，最近的單分子圖像揭示了EcMutS和EcMutL在錯(cuò)配的DNA上形成了級(jí)聯(lián)的滑動(dòng)夾，共同協(xié)助EcMutH在遠(yuǎn)程的新復(fù)制的GATC位點(diǎn)引入ssDNA斷裂。研究人員已經(jīng)成功可視化了完整的鏈特異性切除過(guò)程，并發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)壽命的EcMutL滑動(dòng)夾在ssDNA斷裂附近捕獲了EcUvrD解旋酶，從而顯著提高了其解鏈能力。在這一過(guò)程中，EcSSB調(diào)節(jié)EcMutL-EcUvrD解旋，并且這一過(guò)程很少伴隨著廣泛的ssDNA外切酶消化。這一結(jié)果與一種依賴于EcMut- EcUvrD解旋酶驅(qū)動(dòng)的ssDNA片段在鄰近EcMut-GATC切口之間的移位，并且與外切酶無(wú)關(guān)的MMR鏈切除機(jī)制一致。 在這一研究中，科研人員通過(guò)美國(guó)Azure公司的SapphireTM雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)對(duì)核酸外切酶的活性進(jìn)行了研究。 對(duì)于大多數(shù)成像系統(tǒng)、需要在應(yīng)用的靈活性和圖像質(zhì)量之間做選擇。作為新一代實(shí)驗(yàn)室成像平臺(tái) ，SapphireTM Biomolecular Imager是新一代激光掃描成像系統(tǒng)，兩者兼顧，具有無(wú)與倫比的靈活性、出色的靈敏度和圖像質(zhì)量。無(wú)論使用哪種應(yīng)用，SapphireTM Biomolecular Imager和SapphireTM 采集軟件都能夠提供高質(zhì)量的數(shù)據(jù)。 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
◐ 多達(dá)四個(gè)固態(tài)激光器（488nm，520nm，658nm或685nm可選，785nm），提供極高的激發(fā)靈敏度。
◐ 藍(lán)光檢測(cè)和磷屏成像用PMT，近紅外熒光檢測(cè)使用APDs，可見(jiàn)光和化學(xué)發(fā)光用CCD 。
◐ 超寬動(dòng)態(tài)范圍，同時(shí)成像和定量低豐度和高豐度樣品 。
◐ 圖像分辨率可達(dá)10微米，實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量圖像分析 。
◐ Sapphire Capture和AzureSpot軟件，實(shí)現(xiàn)完美的成像和準(zhǔn)確的分析。
 
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