切向流過濾濃縮基于重組水泡口炎病毒的埃博拉病毒疫苗

基于病毒的生物制品生產中的切向流過濾應用

來自加拿大麥吉爾大學等的科學家們在2019年第37的《Vaccine》雜志上發(fā)表了題為“Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK293SF cells”的文章。文中，研究人員指出埃博拉病毒疾病目前仍是一種為國際社會關切的重點疾病，已有多篇文章報導了數(shù)種疫苗首選物在非人體靈長類動物研究以及臨床試驗中的積極結果，而其中最有前景的是rVSV-ZEBOV疫苗（基于重組水泡口炎病毒的埃博拉病毒Zaire株疫苗）。在此研究中，研究人員嘗試使用懸浮的HEK 293SF細胞和無血清培養(yǎng)基生產rVSV-ZEBOV，其目的是使用HEK 293SF生產平臺，建議工藝，優(yōu)化生產滴度，證實生產的可放大性以及所獲得物料在動物模型中誘導免疫反應的有效性。

文中，生產和純化用于動物研究的rVSV-ZEBOV物料時，以2L搖瓶培養(yǎng)HEK 293SF細胞，工作體積600mL，培養(yǎng)至細胞密度1.88 x 10^6cells/mL，以MOI 0.01感染，感染后48小時收獲培養(yǎng)液，加入10 U/mL Benzonase孵育，消解DNA和RNA。離心收獲含有rVSV-ZEBOV的上清液，使用63mm玻璃纖維預過濾器和0.45μm過濾器兩步過濾。濾液使用配有MWCO 750 kD 中空纖維組件的KrosFlo® Research 2i 切向流過濾系統(tǒng)濃縮40倍，濃縮的病毒再以碘克沙醇密度梯度離心純化，并以由10mM Tris組成并補充4%蔗糖的注射緩沖液洗濾7體積。樣品進一步濃縮至3.5mL，然后加入人血清白蛋白至終濃度2.5 g/L，以確保凍存時，注射緩沖液中的純化病毒的穩(wěn)定性。

原文：J.Gelinas, H.Azizi, S.Kiesslich, et al., Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK 293SF cells. Vaccine, 2019, 37: 6624-6632.

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