如何做好新冠疫情下環(huán)境微生物的監(jiān)控

       新冠疫情下，許多人對環(huán)境中的病毒以及傳播方式忐忑不安，尤其是報道了空氣氣溶膠對新冠病毒傳播的影響，并且也對環(huán)境和空間消毒后的效果心存疑慮。目前，關于開展空氣微生物氣溶膠采樣研究較多，根據不同原理制造的采樣器廣泛用于各領域。如：單級或多級撞擊式采樣器、離心式采樣器、氣旋式采樣器、液體沖擊式采樣器、過濾式采樣器等，在這些類型采樣器中，以安德森空氣微生物采樣器采樣效率最高，所采粒子數較多。在分級采集不同粒度氣溶膠的時候，經常采用安德森采樣器。早在2010年，中國醫(yī)學科學院病原學研究所就進行過用安德森空氣生物采樣器采集病毒氣溶膠的研究。

       當然，一般情況下，我們要直接對空氣中的病毒進行采樣和檢測還相對比較困難，但是，我們通過對空氣中常規(guī)微生物進行采樣和檢測，可以反應出整體環(huán)境的潔凈度，從而評估我們環(huán)境的整體受污染程度和消毒效果。

1.空氣沉降菌：

       通過自然沉降原理收集在空氣中的活微生物粒子，通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。沉降菌的采樣屬于被動式采樣，反映最終落在地面或物體表面的灰塵中攜帶的微生物。
檢測標準：GB/T 18204.3-2013公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第3部分：空氣微生物

                GB/T 16294-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法
 

       檢測方法：常用的檢驗方法是沉降平板法，即測定在一定時間內從空氣中降落到單位面積地面上的微生物個數。

       操作步驟：將融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（霉菌監(jiān)測用沙氏培養(yǎng)基）倒入90mm無菌培養(yǎng)皿中制成平板（或購買商品化沉降皿），按標準要求布設在監(jiān)測點上（監(jiān)測點按標準選擇和布局），打開皿蓋暴露在監(jiān)測環(huán)境中5～30min（動態(tài)監(jiān)測不大于4小時），讓空氣中的微生物降落在平板表面，蓋好皿蓋，然后倒置放入培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48h后計菌落數（SDA培養(yǎng)5天）。

環(huán)凱牌三層無菌包裝沉降皿

2.空氣浮游菌
       用計數濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子，通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。浮游菌的采樣屬主動采樣，反映潔凈區(qū)內空氣中生物粒子的濃度。

       檢測標準：《GB/T16293-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》

       檢測方法：常用撞擊式浮游微生物采樣器，使空氣通過狹縫或小孔產生高速氣流，從而將懸浮在空氣中的微生物（浮游菌）采集到專門的平板培養(yǎng)基上，經實驗室培養(yǎng)后得到進行菌落計數。

2.1單級浮游微生物采樣器

       基于安德森撞擊原理（撞擊法），采集口風速與潔凈室內風速基本一致的等速采樣理論設計，直接采樣，空氣浮游微生物高速通過微孔被撞擊在培養(yǎng)皿內的瓊脂表面，撞擊速度20m/s，相當于安德森撞擊6級，保證大于1微米的顆粒全被捕獲收集。

       采樣步驟：將浮游微生物采樣器放置在監(jiān)測點上，卸下多孔采樣頭和保護蓋，用75%酒精對多孔采樣頭和保護蓋、培養(yǎng)皿座及外表進行擦拭消毒，然后將預先制作好裝有TSA或SDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿（或購買商品化平板）放置于培養(yǎng)皿座上，并將培養(yǎng)皿調整至水平，裝好多孔采樣頭，設定采樣參數，開機進行采樣。采樣結束后，打開多孔采樣頭，取出培養(yǎng)皿，蓋回原培養(yǎng)皿蓋，貼上標簽或寫上編號，置于已到達設定溫度的恒溫培養(yǎng)箱內，進行倒置培養(yǎng)。
 

環(huán)凱牌浮游微生物采樣器
 

2.2 六級浮游微生物采樣器

       整套儀器由六級采樣撞擊器 、采樣控制主機 、六級采樣撞擊器專用三角架組成。六級采樣撞擊器是由六個帶有經硬質氧化的鋁質多孔撞擊采樣圓盤組成的 ，多孔撞擊采樣圓盤上可放置已有采樣介質的無菌平皿 ，所有多孔撞擊采樣圓盤由三個彈簧掛鉤把多孔撞擊采樣圓盤緊密地連接在一起。同級多孔撞擊采樣圓盤上環(huán)形排列著400個孔徑相同的精準微孔 ，不同級撞擊采樣圓盤的孔徑不同 。當含有微生物粒子的空氣進入采樣口后 ，采樣主機氣體采樣流量恒定 ，而氣體通過每一級采樣圓盤不同孔徑的篩孔時 ， 不同大小的微生物粒子按空氣動力學特性分別以不同的速度撞擊在相應的采樣介質表面上。第一級-第二級類似人體上呼吸道捕獲的粒子 ，第三級－第六級類似下呼吸道捕獲的粒子 ，這就在相當程度上模擬了這些粒子在呼吸道的穿透作用和沉著部位。

       采樣步驟：

       1) 將六級采樣撞擊器用75％酒精進行擦拭滅菌（或置于高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌30分鐘），并妥善保管撞擊器備用。

       2) 將撞擊器三角架支開并鎖緊，把三角架頂部調至水平，撞擊器放在三角架的云臺上，主機放在桌上或地上，用橡膠管連接撞擊器出氣口→主機進氣口。

       3) 順序在撞擊器中放入采樣平皿，一手打開平皿蓋，另一手迅速蓋上采樣頭（撞擊盤），然后按住撞擊器上部，掛上三個彈簧掛鉤。放入和取出采樣平皿時，必須戴口罩，以防口鼻排出微生物污染平皿。

       4) 打開電源開關，設定相關參數，將撞擊器置于監(jiān)測點，打開撞擊器進氣口上蓋，離開采樣點2米之外，即可啟動采樣。

       5) 采樣完成后，松開拉鉤彈簧，逐層打開多孔采樣頭（撞擊盤），取出培養(yǎng)皿，蓋回原培養(yǎng)皿蓋，貼上標簽或寫上編號，置于已到達設定溫度的恒溫培養(yǎng)箱內，進行倒置培養(yǎng)。

環(huán)凱牌六級浮游微生物采樣器