新冠病毒研究用水系列三：如何獲得完美的核酸電泳條帶

什么是核酸電泳？
核酸電泳是基因操作的核心技術(shù)之一，用于分離、鑒定DNA、RNA 分子混合物和純化DNA片段。
核酸電泳最讓大家頭疼的問(wèn)題 - 異常條帶
核酸電泳實(shí)驗(yàn)中，常常會(huì)遇到條帶模糊、拖尾、扭曲等現(xiàn)象，究其原因，除了操作不當(dāng)，電泳條件未優(yōu)化，電泳緩沖液也是重要的影響因素之一。電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的電泳遷移率。  

• 緩沖液離子強(qiáng)度低，電導(dǎo)率小，導(dǎo)致DNA遷移緩慢；如果多次使用，離子強(qiáng)度降低，PH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。
• 緩沖液離子強(qiáng)度高，則電導(dǎo)率高并明顯產(chǎn)熱，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起凝膠熔化或DNA變性。

   

常見(jiàn)問(wèn)題	原因	解決方法
條帶模糊	核酸降解	使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液
	電泳緩沖液陳舊	建議經(jīng)常更換緩沖液
	有蛋白污染	使用低有機(jī)物的超純水配置緩沖液
	核酸變性	使用超純水或者緩沖液稀釋樣品
條帶黯淡	核酸濃度過(guò)低	增加上樣量
	核酸降解	使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液
	條帶被示蹤染料掩蓋	提高上樣量；避免使用與目的片段遷移率相同的示蹤染料
拖帶或涂抹帶	PCR體系或PCR程序不合適	優(yōu)化PCR體系和PCR程序
條帶扭曲	配膠的緩沖液和電泳緩沖液不同	配膠和電泳中使用同一批緩沖液
	電泳時(shí)電壓過(guò)高	控制電泳時(shí)電壓不超過(guò)6V/CM

核酸電泳用純水要求
為了防止水中雜質(zhì)（如：核酸酶、蛋白質(zhì)、離子等）對(duì)電泳結(jié)果的影響，核酸電泳實(shí)驗(yàn)配置緩沖溶液或稀釋樣品需要使用超純水：

• 電阻率 18.2 MΩ·cm
• TOC < 10 ppb
• 無(wú)核酸酶和蛋白酶
• 細(xì)菌總數(shù)< 1 CFU/mL
• 熱原< 0.005 EU/mL
• 0.22μm 或更低的顆粒過(guò)濾

核酸電泳用純水機(jī)推薦 

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