鈣指示劑在GPCR和鈣離子通道功能分析的應(yīng)用

用于GPCR和鈣離子通道功能分析的一系列鈣指示劑（二）

將所有的鈣離子綠色熒光探針?lè)旁谝黄�，它們的激發(fā)發(fā)射光線有多大差異？哪款產(chǎn)品的相對(duì)亮度更高？細(xì)胞內(nèi)保留時(shí)間更長(zhǎng)？細(xì)胞加載時(shí)間更短？AAT Bioquest最亮的綠色鈣離子熒光探針的性能如何？感興趣的朋友一起來(lái)看看吧！

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綠色鈣離子熒光探針的比較

產(chǎn)品名稱	Ex/Em(nm)	(信號(hào)背景比)S/B	相對(duì)亮度	細(xì)胞內(nèi)保留	加載時(shí)間	其他
Fluo-3	506/526	2	50	相比最低	1 h	在相同條件下，Calbryte探針的亮度明顯更高
Fluo-4	494/516	4.5	100	低	1 h
Fluo-8	490/514	4.5	~200	低	0.5-1 h
Cal-520	492/514	9.0	~150	高	1-2 h
Calbryte-520	490/514	10.0	~350	高	0.5-1 h

Calbryte-520的主要功能：

1.異常明亮
2.在細(xì)胞中比Fluo-3和Fluo-4大大提高了信噪比
3.明顯增強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)保留（減少甚至消除了丙磺舒的使用）
4.更快的細(xì)胞加載

圖1.各種綠色鈣離子熒光指示劑對(duì)比圖。

 

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Calbryte 520與市售的其他綠色鈣離子指示劑的各類數(shù)據(jù)對(duì)比

內(nèi)源性Gq的鈣含量測(cè)定---Calbryte 520 vs. Fluo-4

圖2.用熒光顯微鏡ATP誘導(dǎo)CHO-K1細(xì)胞內(nèi)源性P2Y受體反應(yīng)。Calbryte 染料產(chǎn)生更亮的信號(hào)，更高的信噪比，并大大增強(qiáng)了細(xì)胞保留能力。

 

外源Gq的鈣含量測(cè)定---Calbryte 520 vs. Fluo-4

 

Calbryte 520無(wú)丙磺舒免洗試劑盒與FLIPR Calcium 4檢測(cè)試劑盒數(shù)據(jù)分析

圖3.CHO-K1細(xì)胞中內(nèi)源性P2Y受體對(duì)ATP的熒光信號(hào)響應(yīng)的比較。 將CHO-K1細(xì)胞以50,000個(gè)細(xì)胞/ 100 µL /孔在黑色96孔板中接種過(guò)夜。 使用Screen Quest Calbryte 520無(wú)丙磺舒和免洗的鈣測(cè)定試劑盒（紅色），F(xiàn)LIPR鈣4測(cè)定試劑盒（藍(lán)色）和Fluo-4直接鈣測(cè)定試劑盒（綠色）測(cè)量鈣通量響應(yīng)。 FlexStation 3添加了ATP（50 µL /孔）以達(dá)到最終指示的濃度。

 

Calbryte 520和Fluo-4在GPCR（Gi）靶向難標(biāo)記受體中的應(yīng)用數(shù)據(jù)對(duì)比

圖4.Rantes在Flexstation中刺激了趨化因子受體5（CCR5）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞（Cat＃38105）中的鈣反應(yīng)(注：上方，深綠色線條為Calbryte 520；下方，淺綠色線條為Fluo-4)

 

Calbryte 520與GPCR（Gi）目標(biāo)間接cAMP檢測(cè)的應(yīng)用

 

圖5.嵌合G蛋白（Gqi，Gqo，Gqs，Gqz）或混雜G蛋白（Gα16）可以與Gi，Go或Gs蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合，產(chǎn)生外源性細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)。

圖6.使用Calbryte-520 PBX NW試劑盒（#36318）在CHO-Ga16-NOP細(xì)胞（#38100）中測(cè)量了傷害感受肽刺激的鈣反應(yīng)。

 

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貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
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