PCR核酸檢測實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)

 　　PCR實(shí)驗(yàn)室的裝修建造大致包括實(shí)驗(yàn)室的布局、實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)裝修、PCR實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)系統(tǒng)、PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)注意事項(xiàng)等。
 
　　①PCR實(shí)驗(yàn)室的布局

　　PCR實(shí)驗(yàn)室又稱基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室原則上分為4個單獨(dú)的工作區(qū)域，前雨區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。

　　實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)到樣品制備區(qū)到擴(kuò)增區(qū)再到擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不能逆向流動。

　　實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動。各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間，工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室，并有明顯的標(biāo)志，各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連，需安裝物品傳遞窗。每個工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈，紫外燈的波長為254m,安裝數(shù)量為每20m安裝一支40W的紫外燈。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室理想的布局應(yīng)有一個專用走廊，試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很規(guī)范地排列在一起，前三個區(qū)各有一個緩沖間，可供換工作服和工作鞋使用，頂上可裝一紫外燈。

　　內(nèi)實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)為正壓或常壓狀態(tài)，緩沖間內(nèi)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)(可上設(shè)一抽風(fēng)裝置)，使這三個區(qū)的空氣流向?yàn)橛蓪?shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)向外，緩沖間內(nèi)通向內(nèi)實(shí)驗(yàn)室和走廊的門可安裝一種連鎖裝置，當(dāng)一個門打開時，另一門必須處于關(guān)閉狀態(tài)，防止出現(xiàn)兩個門同時打開的情況。

　　產(chǎn)物分析區(qū)可不設(shè)緩沖間，但應(yīng)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)(裝一個排風(fēng)扇即可)、使空氣流向由外向內(nèi)，以防止擴(kuò)增產(chǎn)物的隨空氣流出。

　　每一區(qū)域都須有明確的標(biāo)記，工作按試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)至產(chǎn)物分析區(qū)單一流向進(jìn)行，各區(qū)的儀器設(shè)備包括工作服、鞋、實(shí)驗(yàn)記錄本和筆等都必須專用。

　　以上要求做不到的話，這些基本要求務(wù)必做到：四個區(qū)域必須是相互獨(dú)立的;各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的;各區(qū)完全獨(dú)立，緩沖間可有可無。如為一個區(qū)套一個區(qū)的模式，區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作服及鞋子用，并保證兩個區(qū)域間始終處于完全的分隔狀態(tài);產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風(fēng)扇或其他抽風(fēng)裝置，維持負(fù)壓。
 

 

　　②PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備清單

　　PCR實(shí)驗(yàn)室的主要設(shè)備：實(shí)驗(yàn)臺、天平、冰箱、低溫冰箱、離心機(jī)、洗眼器、加樣器、振蕩器、紫外燈、冰箱、生物安全柜(或潔凈工作臺、或者排風(fēng)柜排毒柜)、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、通風(fēng)排風(fēng)系統(tǒng)、核酸擴(kuò)增設(shè)備、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、水浴箱、實(shí)時熒光定量PCR儀等實(shí)驗(yàn)室相關(guān)配件。以上設(shè)備根據(jù)各區(qū)的需求，數(shù)量不定。具體實(shí)驗(yàn)室設(shè)備清單請致電我們或留言

　　③PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的作用功能

　　PCR實(shí)驗(yàn)室包括4個區(qū)域：試劑準(zhǔn)備區(qū)/樣品制備區(qū)/擴(kuò)增區(qū)/擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，各區(qū)分別滿足不同的操作

　　試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存。未設(shè)緩沖間的試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)，工作區(qū)域?yàn)檎龎�。用于擴(kuò)增的試劑應(yīng)冰凍儲存。

　　樣品制備區(qū)：實(shí)驗(yàn)室樣品的混樣和測試樣品的制備。未設(shè)緩沖間時工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓，可安裝排風(fēng)系統(tǒng)。所用的器具在使用前應(yīng)經(jīng)過徹底清洗并消毒，防止交叉污染。

　　擴(kuò)增區(qū)：PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和模板的加入，核酸擴(kuò)增。未設(shè)緩沖間的擴(kuò)增區(qū)，工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓，可安裝排風(fēng)系統(tǒng)。加樣應(yīng)在超凈工作臺(生物安全柜)內(nèi)進(jìn)行，超凈工作臺的氣流方向宜選擇垂流式。

　　擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。未設(shè)緩沖間的擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)，工作區(qū)為負(fù)壓或減壓，應(yīng)安裝排風(fēng)系統(tǒng)。若實(shí)驗(yàn)僅采用全自動擴(kuò)增檢測儀(如實(shí)時熒光定量PCR儀)，可將擴(kuò)增區(qū)與擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并為一個區(qū)。
 

 

　　④PCR實(shí)驗(yàn)室的裝修施工

　　PCR實(shí)驗(yàn)室裝修的要點(diǎn)

　　PCR實(shí)驗(yàn)室的墻體和頂棚應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好;所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕易清洗消毒;地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

　　地面使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好，便于進(jìn)行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚(≥800mm)接縫需要小于2mm。燈具要選用凈化燈具，能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。

　　在實(shí)驗(yàn)區(qū)和緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部要安裝外燈，消毒使用。在準(zhǔn)備區(qū)和制備區(qū)設(shè)置移動緊外線燈，對實(shí)驗(yàn)臺等進(jìn)行局部消毒。

　　試劑和標(biāo)本應(yīng)通過機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞。

　　⑤PCR實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)系統(tǒng)

　　PCR實(shí)驗(yàn)室的各個區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實(shí)驗(yàn)過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室的凈化要求，為避免各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交又污染的可能，優(yōu)先采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

　　⑥PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)和使用規(guī)范的注意事項(xiàng)

　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)預(yù)算和實(shí)際使用情況選擇對應(yīng)的設(shè)備、潔凈度、周邊設(shè)施等

　　實(shí)驗(yàn)室區(qū)的工作人員安全防護(hù)方面要有應(yīng)急方案

　　實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)的所有相關(guān)物品都要做明顯的標(biāo)記，防止混淆

　　PCR各區(qū)域應(yīng)盡量避免減少不必要的走動

　　建議實(shí)驗(yàn)室工作人員不同區(qū)域不同的工作服，且工作服不能帶出

　　操作者培訓(xùn)上崗，經(jīng)常更換使用的一次性醫(yī)療耗材