即用型水凝膠在成人小腸類器官的培養(yǎng)與分化中的應(yīng)用

瀏覽次數(shù)：2029　發(fā)布日期：2020-8-27　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

VitroGel™是一種即用型、無外源性(Xeno-Free)的多糖水凝膠體系，可模擬天然的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)環(huán)境。VitroGel™使用方便操作簡單，只需與細(xì)胞培養(yǎng)基混合即可轉(zhuǎn)變?yōu)榭烧{(diào)的水凝膠基質(zhì)。VitroGel™優(yōu)點(diǎn)眾多，應(yīng)用廣泛，有效的彌補(bǔ)了體內(nèi)外研究的鴻溝。本文主要為大家詳細(xì)介紹VitroGel™。

☰ 工作原理

20分鐘快速成膠(包括10-15分鐘水凝膠穩(wěn)定時(shí)間)。
VitroGel™與細(xì)胞培養(yǎng)基中的離子(如Ga²⁺或Na⁺)相互作用，室溫穩(wěn)定15分鐘即可形成水凝膠。成膠后在水凝膠表面覆蓋一層培養(yǎng)基，可進(jìn)一步促進(jìn)水凝膠交聯(lián)形成較硬的水凝膠。

☰ 產(chǎn)品特點(diǎn)

	即用型：單瓶體系，只需與細(xì)胞混勻即可!
	無異源蛋白成分：VitroGel 3D為無動(dòng)物源性多糖水凝膠體系。

	室溫穩(wěn)定：該水凝膠體系室溫穩(wěn)定，pH中性。冰盒可以不用啦!
	透明：該水凝膠體系顏色透明，兼容不同的成像系統(tǒng)，便于細(xì)胞觀察。

	細(xì)胞容易收獲：3D細(xì)胞培養(yǎng)后，可通過離心從水凝膠中輕松收獲細(xì)胞。
	可注射：使用恰當(dāng)?shù)幕旌媳壤撍z可用于注射，適合體內(nèi)研究。

☰ VitroGel™3D培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)

與其他3D培養(yǎng)方式相比VitroGel 3D集眾多優(yōu)點(diǎn)于一身(詳見下表)

☰ 產(chǎn)品應(yīng)用

VitroGel™有兩種類型：VitroGel 3D和VitroGel 3D-RGD；它們的使用方法及產(chǎn)品特點(diǎn)相同，不同點(diǎn)在于VitroGel 3D多用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，VitroGel 3D-RGD因在水凝膠中添加了整合素的配基RGD肽，因此更有利于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。

VitroGel™可應(yīng)用于^❶3D細(xì)胞培養(yǎng)、^❷體內(nèi)注射、^❸細(xì)胞侵襲&遷移實(shí)驗(yàn)、^❹細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)、^❺藥物篩選、^❻干細(xì)胞培養(yǎng)、2D細(xì)胞培養(yǎng)等諸多方面，下面來詳細(xì)介紹一下。

01/ 3D細(xì)胞培養(yǎng)

● VitroGel 3D

VitroGel 3D培養(yǎng)的Betalox 5細(xì)胞優(yōu)于普通2D培養(yǎng)，更易粘附形成細(xì)胞簇或成球，細(xì)胞生存能力增強(qiáng)。

圖1

數(shù)據(jù)來源：The Well

● VitroGel 3D長期培養(yǎng)優(yōu)于Matrigel

B35細(xì)胞在分化后第3天開始擴(kuò)散并形成神經(jīng)元樣網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，從細(xì)胞存活、培養(yǎng)擴(kuò)散和形態(tài)學(xué)分析來看，第3天在VitroGel 3D和Matrigel 3D中培養(yǎng)的B35細(xì)胞效果相當(dāng)。隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，到第七天VitroGel 3D中培養(yǎng)的B35細(xì)胞有自組織形成3D細(xì)胞簇的傾向，此時(shí)Matrigel中培養(yǎng)的B35細(xì)胞仍為分散的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)；第14天在Matrigel中培養(yǎng)的細(xì)胞存活率急劇下降，大多數(shù)細(xì)胞分離，神經(jīng)突回縮， VitroGel 3D中培養(yǎng)的細(xì)胞則無此現(xiàn)象。到第21天，Matrigel中培養(yǎng)的絕大多數(shù)細(xì)胞消失，VitroGel 3D中培養(yǎng)的細(xì)胞簇早已嵌入到水凝膠中，雖然細(xì)胞簇間的細(xì)胞數(shù)很少，但細(xì)胞無凋亡現(xiàn)象。

圖2：神經(jīng)元 (B35) 細(xì)胞在VitroGel 3D與Matrigel中長期培養(yǎng)的結(jié)果比較 (β- III -微管蛋白(綠色)標(biāo)染細(xì)胞骨架，用DAPI(藍(lán)色)標(biāo)染細(xì)胞核。)

數(shù)據(jù)來源：The Well

● VitroGel 3D-RGD

在VitroGel RGD中生長的OP9細(xì)胞更易形成細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。

圖3：VitroGel RGD中培養(yǎng)第7天10x (左)

圖4: VitroGel RGD中培養(yǎng)第7天20x (右)

數(shù)據(jù)來源：The Well

02/ 體內(nèi)注射

● VitroGel-3D-RGD

VitroGel 3D-RGD形成的軟水凝膠，無任何外源性動(dòng)物成分的引入，可作為良好的細(xì)胞移植支架。

圖5：VitroGel-3D-RGD與NPMSC(髓核間充質(zhì)干細(xì)胞)混合后，注射入動(dòng)物體內(nèi)示意圖

VitroGel3D-RGD作為移植支架時(shí)提供的有利環(huán)境，能夠很好的維持移植細(xì)胞(NPMSC)的存活能力。移植的NPMSC均用熒光探針標(biāo)記，使用活體成像技術(shù)(IVIS)檢測(cè)感興趣區(qū)域(ROI)的熒光值，以此分析移植細(xì)胞的存活率。移植第一天H-gel+cell組與單獨(dú)cell組相比無差異，移植第三十天時(shí)H-gel+cell組的存活率明顯高于cell組。