Naica數(shù)字PCR在湖南疾控檢測精子、全血、尿糞樣本中新冠病毒的應(yīng)用

Paper -1：

全球新型冠狀病毒肺炎疫情日益嚴(yán)峻，除了齊心協(xié)力對(duì)抗病毒外，科研人員也在對(duì)新冠病毒進(jìn)行更深入的研究，比如疫苗研發(fā)，感染后患者生理機(jī)能是否會(huì)受影響等。其中，關(guān)于新冠對(duì)生殖方面的影響一直備受關(guān)注，迄今為止，已在精液和精子中檢測到27種病毒。那么在新冠大流行的背景下，SARS-CoV-2（covid-19）是否存在于精液中呢？如果精液樣本中存在極低病毒載量的SARS-CoV-2（covid-19），一旦被使用，那么必定會(huì)有傳染風(fēng)險(xiǎn)。
 

湖南省疾病預(yù)防控制中心以湖南省人類精子庫在大流行期間和之后收集的冷凍精液為研究對(duì)象，開展了一項(xiàng)回顧性研究，并發(fā)表在《Reproductive BioMedicine Online》雜志上。  研究包括來自100個(gè)供體的100對(duì)精液和血液樣本，考慮到兩種標(biāo)本的病毒載量均較低，所以研究人員使用了自主改良的一步法-單管巢式定量PCR（OSN-qRT-PCR）進(jìn)行SARS-CoV-2（covid-19）檢測。此外，為了避免出現(xiàn)“假陰性結(jié)果”，使用Naica™數(shù)字PCR（cd-PCR）對(duì)來自陰性精液樣品的RNA進(jìn)行了第二輪群體檢測。

結(jié)果：對(duì)于單個(gè)血液和精液樣本，分別檢測了核衣殼蛋白（N）和開放閱讀框（ORF-1ab）基因，在100對(duì)樣本中均呈陰性。此外，根據(jù)cd-PCR結(jié)果，群體檢測的RNA樣本中，每孔均> 20,000個(gè)微滴，并且均不存在陽性液滴。

結(jié)論：冠狀病毒大流行期間和之后，湖南省人類精子庫冷凍保存的精液均不含SARS-CoV-2（covid-19），可以安全使用。

Paper -2：

本研究對(duì)已經(jīng)確診的3例新型冠狀病毒肺炎患者按照不同時(shí)間的全血、尿液、糞便標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行qPCR和Naica™數(shù)字PCR（cd-PCR）的核酸檢測，并比較了兩種方法檢測各類樣本中2019-nCoV的差異性，提出改進(jìn)2019-nCoV核酸檢測的綜合策略，為核酸檢測陰性患者提供更多診斷支持。

本實(shí)驗(yàn)中數(shù)字PCR在病例發(fā)病早、中、晚期標(biāo)本中均能檢測到陽性微滴，而qPCR漏檢了發(fā)病小于5天的標(biāo)本，檢測到的陽性核酸均以中晚期為主。（表2）這也解釋了受檢測方法靈敏度的局限性，目前大部分假陰性患者都處于疾病發(fā)展的早期。此外，在本次實(shí)驗(yàn)中數(shù)字PCR在重癥病例的三種標(biāo)本中均測到陽性微滴，但因?yàn)檠�、尿和可疑糞便的標(biāo)本病毒載量偏低，qPCR檢測均為陰性。（表3）

總之，數(shù)字PCR技術(shù)可以有效克服qPCR靈敏度不足的難題，精準(zhǔn)捕捉到病毒載量較低的血液、尿液和可疑的糞便或肛拭子標(biāo)本，是qPCR的有益補(bǔ)充，為幫助臨床醫(yī)生準(zhǔn)確判斷早期感染及患者是否真正痊愈起到了積極的作用，對(duì)2019-nCoV的長期監(jiān)控有重要的意義。

兩篇Paper均采用了--Naica™數(shù)字PCR平臺(tái)

法國Stilla Technologies公司的Naica™數(shù)字PCR技術(shù)在進(jìn)行核酸檢測時(shí)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。系統(tǒng)利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的耗材。樣品通過毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個(gè)微滴的形式進(jìn)入2D芯片中。3色熒光檢測儀器，整個(gè)流程只需要2.5小時(shí)，并可進(jìn)行數(shù)據(jù)的質(zhì)控和結(jié)果追溯分析，獲得的數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。

操作流程：

原文鏈接：

Paper1：doi.org/10.1016/j.rbmo.2020.11.015

Paper2：doi:10.3969/j.issn.1006-3110.2020.11.009