賽業(yè)生物VISTA人源化小鼠在腫瘤研究的應(yīng)用

 

 

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免疫檢查點(diǎn)是指免疫細(xì)胞擁有的一組具有調(diào)節(jié)和控制免疫應(yīng)答持久性同時(shí)保持自我耐受的信號(hào)通路分子。免疫檢查點(diǎn)可以是刺激性或抑制性的。免疫應(yīng)答的功效由共刺激信號(hào)和共抑制信號(hào)之間的微妙平衡決定。程序性死亡蛋白配體1（PD-L1）是臨床實(shí)踐中唯一獲準(zhǔn)使用的生物標(biāo)志物，已被證明在選擇患者接受免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療方面是不完善的。因此，需要新的生物標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)以最大化免疫療法的功效。

 

T細(xì)胞活化的V結(jié)構(gòu)域Ig抑制因子（V-domain Ig suppressor of T-cell activation, VISTA）是一種新的免疫調(diào)節(jié)受體，廣泛表達(dá)于髓系和淋巴細(xì)胞上，常被認(rèn)為是多種癌癥預(yù)后不良的指標(biāo)。臨床前研究的動(dòng)物模型上通過基因敲除或抗體阻斷VISTA都能激活T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的響應(yīng)。

圖1. VISTA在抗腫瘤免疫中的抑制性免疫檢查點(diǎn)作用。VISTA在腫瘤細(xì)胞和/或免疫細(xì)胞上的陽性表達(dá)可誘導(dǎo)多種癌癥類型的免疫抑制環(huán)境。

 

但是VISTA調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)活化和抑制過程的機(jī)制尚未完全闡明。近期浙江大學(xué)的研究人員通過文獻(xiàn)梳理和計(jì)算機(jī)測(cè)算對(duì)VISTA在不同種癌癥所呈現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，與對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制作用相反，VISTA的高表達(dá)與幾種特定癌癥類型的良好預(yù)后密切相關(guān)。因此，VISTA具有作為抗腫瘤免疫的刺激性檢查點(diǎn)的潛力，其機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

 

目前有兩項(xiàng)針對(duì)VISTA的癌癥治療藥物的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中：CA-170和 CI-8993。2015年10月，Curis獲得了首個(gè)口服小分子拮抗劑CA-170的許可。CA-170選擇性靶向PD-L1和VISTA（兩者都是抑制性檢查點(diǎn)，可以抑制T細(xì)胞增殖）。今年2月，Curis宣布CA-170將進(jìn)入IIb/III期隨機(jī)研究，在約240例nsNSCLC患者中評(píng)估CA-170聯(lián)合放化療的療效。CI-8993是一種針對(duì)VISTA的單克隆抗體，具有潛在的抑制性檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性。CI-8993是一種針對(duì)VISTA的單克隆抗體，具有潛在的抑制性檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性。

 

VISTA的作用正在評(píng)估中，當(dāng)前可獲得的安全性和有效性數(shù)據(jù)并不排除進(jìn)一步的研究。為了更好地了解VISTA參與和調(diào)控的分子途徑，并在體內(nèi)鑒定其配體，對(duì)于確定該生物標(biāo)記物在免疫檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑中的作用及其作為治療靶點(diǎn)的意義可能至關(guān)重要。

 

參考文獻(xiàn)：

1. Tagliamento M , Bironzo P , Novello S . New emerging targets in cancer immunotherapy: the role of VISTA[J]. ESMO Open, 2020, 4(Suppl 3):683.

2. VISTA: an immune regulatory protein checking tumor and immune cells in cancer immunotherapy[J]. Journal of Hematology & Oncology, 2020, 13(1):1-13.

 

賽業(yè)生物VISTA人源化小鼠，助力腫瘤研究

品系背景：C57BL/6N

 

品系構(gòu)建策略：

在小鼠VISTA位點(diǎn)敲入人源VISTA基因的胞外區(qū)和跨膜區(qū)序列，保留鼠源VISTA基因的胞內(nèi)區(qū)，構(gòu)建嵌合型的VISTA人源化小鼠模型。

 

品系說明：

■ hVISTA在小鼠體內(nèi)表達(dá)具有正常的生理表達(dá)和調(diào)節(jié)模式。

■ 小鼠的免疫系統(tǒng)功能健全。

■ 缺乏小鼠靶基因的表達(dá)，從而避免了交叉反應(yīng)。

 

研究應(yīng)用：

■ 能在免疫系統(tǒng)功能健全的小鼠中進(jìn)行靶向人免疫檢查點(diǎn)VISTA的免疫腫瘤藥物的體內(nèi)功效評(píng)估和分析。

■ 條件性基因敲除小鼠可以對(duì)化合物的特異性和毒性進(jìn)行組織特異性評(píng)估。

■ 與hPD-1小鼠雜交（hPD-1/hVISTA）：這種雙人源化的hPD1/hVISTA模型能夠在免疫系統(tǒng)功能健全的小鼠中評(píng)估靶向人VISTA和/或人PD-1的兩種化合物。

 

模型驗(yàn)證：

圖2. hVISTA在VISTA人源化小鼠中的表達(dá)模式與mVISTA在野生型小鼠中的表達(dá)模式一致。hVISTA和mVISTA分別在VISTA人源化小鼠和野生型小鼠的 (A) Tregs（viable, CD3+CD4+CD25+Foxp3+）、（B）CD11bHigh (viable, CD3-CD19-）、(C) CD4+T細(xì)胞 (viable, CD3+CD4+Foxp3-) 和 (D) CD8+T細(xì)胞 (viable, CD3+CD8+) 上表達(dá)。在純合VISTA 敲除小鼠的細(xì)胞上未檢測(cè)到VISTA。

 

圖3. hVISTA對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞發(fā)揮功能。從脾臟和淋巴結(jié)分離T細(xì)胞（CD4+CD25-），并用αCD3和hVISTA-Fc、mVISTA-Fc或IgG-Fc激活3天。（A）用CFSE稀釋法測(cè)定細(xì)胞增殖；（B）ELISA法測(cè)定細(xì)胞上清中IL-2的產(chǎn)生。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

 

圖4. 人源VISTA單抗聯(lián)合抗小鼠PD-1發(fā)揮抗腫瘤作用。野生型和人源化VISTA小鼠接種MC38腫瘤細(xì)胞，并采取αKLH（對(duì)照），αmPD-1（鼠源PD-1單抗），αhVISTA及αmPD-1+αhVISTA（鼠源PD-1單抗和人源VISTA單抗聯(lián)合用藥）四種治療方式。測(cè)量（A）野生型和（B）純合hVISTA小鼠在不同時(shí)間點(diǎn)的腫瘤體積。（C）分析純合hVISTA小鼠在接種MC38腫瘤后50天內(nèi)的存活率。在VISTA人源化小鼠中，αmPD-1+αhVISTA聯(lián)合用藥的抗腫瘤效果最好。

 

引用文獻(xiàn)精選：

1. Eltanbouly M A, Zhao Y, Nowak E C, et al. VISTA is a checkpoint regulator for naïve T cell quiescence and peripheral tolerance. Science, 2020, 367(6475).

2. Johnston R J, Su L J, Pinckney J, et al. VISTA is an acidic pH-selective ligand for PSGL-1. Nature, 2019, 574(7779): 565-570.

 

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