超濾管與超濾膜包在病毒純化中的應(yīng)用

今天要聊的主角是一位小朋友——病毒。

今年的COVID-19全球大流行也讓這位小朋友成了家喻戶(hù)曉的熊孩子。而和這位小朋友長(zhǎng)期接觸的家長(zhǎng)都知道，這位熊孩子一點(diǎn)都不好管。比如怎么逮住他，因?yàn)樗�總是有很多辦法讓他的小兄弟來(lái)逃脫，那怎么樣最大限度的逮住這幫熊孩子呢？今天我們就講講因材施教，不同病毒的不同的濃縮和提取的方法。

由于病毒在進(jìn)化過(guò)程中衍生出各種機(jī)制進(jìn)行相互作用并操縱靶細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，也使得現(xiàn)代分子生物學(xué)利用病毒進(jìn)行的應(yīng)用研究與日俱增。而在這些常見(jiàn)的病毒研究中，病毒或病毒樣顆粒（VLP）的制備，處理和分析通常需要濃縮和純化的步驟。這個(gè)前處理的過(guò)程的優(yōu)劣是后面我們對(duì)病毒的分析能否完整正確的基礎(chǔ)。而從病毒本身的特性來(lái)看，一般病毒的顆粒大小都在20nm到幾百納米之間，使用超濾管（Sartorius Vivaspin®系列）或是超濾膜包（Sartorius Vivaflow®系列）進(jìn)行提取是非常適合的方法。而具體超濾產(chǎn)品的選擇標(biāo)準(zhǔn)和原則則和病毒的類(lèi)型以及后續(xù)的應(yīng)用密切相關(guān)，這也是常常為大家所忽略的。

比如如下幾種情況，你是否知道什么樣的超濾產(chǎn)品最合適呢：
- 如何純化在醫(yī)學(xué)研究中的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的病毒？
- 如何從水中或是食品中濃縮和提取病原體病毒？
- 如何純化海洋中的噬菌體病毒？
- 如何進(jìn)行冠狀病毒（刺突蛋白）的濃縮？
- 如何進(jìn)行廢水中病毒體和/或病毒RNA的濃縮和捕獲？

如果你平時(shí)正好在為這些問(wèn)題而糾結(jié)，那就快來(lái)搬好小板凳，我們來(lái)詳細(xì)講解一下這幾種情況的病毒純化。

首先，我們先來(lái)看看如何純化在醫(yī)學(xué)研究中的哺乳動(dòng)物病毒。

在現(xiàn)代的醫(yī)學(xué)研究中，病毒和病毒樣顆粒VLP越來(lái)越成為主要的研究熱點(diǎn)，特別是用于研究治療傳染性病毒類(lèi)疾病，或是開(kāi)發(fā)疫苗或抗病毒藥物。由于某些病毒樣顆粒VLP可以定向控制遺傳物質(zhì)，被廣泛用于基因治療方法的開(kāi)發(fā)。此外，病毒載體還可以將基因轉(zhuǎn)移至細(xì)胞系，他這種特性使得他作為傳遞遺傳物質(zhì)的載體也是一種成熟的轉(zhuǎn)染方法，例如在體內(nèi)和體外處理哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

在醫(yī)學(xué)研究中，使用賽多利斯超濾裝置（Vivaspin®和Vivaflow®）純化并濃縮病毒和病毒樣顆粒VLP的參考文獻(xiàn)非常多，也是一種常見(jiàn)的，并被常規(guī)用于濃縮和提取的過(guò)程之中的方法。那么，大家關(guān)心的具體怎么選型的各種情況小編也為大家整理了一個(gè)表，這樣我們就可以因材施教了。（表1）

表1
Vivaspin® 和Vivaflow®
在醫(yī)學(xué)研究中的病毒應(yīng)用實(shí)例匯總

在其他的一些表上沒(méi)有提及的應(yīng)用中，比如濃縮經(jīng)離子交換色譜法純化后的腺相關(guān)病毒（AAV）和慢病毒載體（文獻(xiàn)1–3）；在血清上制備丙型肝炎病毒（HCV）陽(yáng)性血清的空白樣品（4）等可以查閱下列文獻(xiàn)。


由于篇幅有限，小伙伴們可以掃描二維碼下載《綜述：超濾法濃縮與純化病毒》詳細(xì)了解各種應(yīng)用，并同時(shí)申請(qǐng)?jiān)囉觅惗嗬�斯剛剛上市的再生纖維素膜（RC）超濾管。

另外，除了再生纖維素膜（RC）超濾管，賽多利斯還有聚醚砜膜(PES)，醋酸纖維素膜(CTA)和專(zhuān)利的hydrosart膜的超濾產(chǎn)品可供選購(gòu)。



-參考文獻(xiàn)-

【1】Hagen, S. et al. Modular adeno-associated virus (rAAV)vectors used for cellular virus-directed enzyme prodrug therapy. Sci. Rep. 4, 3759 (2014).

【2】Schindler, S. E. et al. Photo-activatable Cre recombinase regulates gene expression in vivo. Sci. Rep. 5, 13627(2015).

【3】Scherr, M. et al. Efficient gene transfer into the CNS by lentiviral vectors purified by anion exchange chromatography. Gene Ther. 9, 1708–1714 (2002).

【4】Granato, M. et al. HCV derived from sera of HCV infected patients induces pro-fibrotic effects in human primary fibroblasts by activating GLI2. Sci. Rep. 6,30649 (2016).