Azure Cielo™ 實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)在快速可靠地檢測(cè)新冠病毒的應(yīng)用

在應(yīng)對(duì)病毒性大流行疾病時(shí)，為了有效控制病毒傳播和減少感染人群，快速且可靠的診斷是至關(guān)重要的。那么目前檢測(cè)COVID-19的 "黃金標(biāo)準(zhǔn) "依賴于一種成熟的技術(shù)，即反轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)，也叫RT-qPCR。簡(jiǎn)而言之，這一程序包括RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA或cDNA，以及用熱循環(huán)儀對(duì)轉(zhuǎn)錄本（病毒基因組的特異性）進(jìn)行實(shí)時(shí)定量。

為了早期檢測(cè)和診斷，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀必須能夠檢測(cè)非常少量的病毒RNA。研究表明，檢測(cè)限(LOD)或以>95%置信度檢測(cè)到的最低RNA濃度，表示每1μL可能只有1拷貝的病毒RNA。因此，我們準(zhǔn)備用COVID-19 RNA來(lái)確定Azure Cielo™的LOD。
 

材料和方法

Azure Cielo™ 實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的LOD或分析靈敏度使用FDA批準(zhǔn)的COVID-19 genesig® Real-Time PCR assay進(jìn)行檢測(cè)，如使用說(shuō)明書（IFU）所述。使用試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照模板（PCT）生成6點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下所示：
 

▲ 表1. PCT系列稀釋液
 

SARS-CoV-2全基因組RNA從歐洲病毒全球檔案館（EvaG）獲得，并按照IFU中的描述進(jìn)行連續(xù)稀釋，每個(gè)稀釋液進(jìn)行20次重復(fù)。
 

結(jié)果和討論

通過(guò)表1的PCT稀釋液得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），將病毒RNA/μL的拷貝數(shù)與Cq值關(guān)聯(lián)起來(lái)。
 

▲ 圖1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線
 

數(shù)據(jù)顯示，在12.5cp/μL、1.25cp/μL和0.625cp/μL時(shí)，Azure Cielo™ 實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)均檢測(cè)到20/20（100%）的重復(fù)，Cq平均值分別是30.49（圖2，綠色）、33.66（圖2，黃色）和34.80（圖2，橙色）。在0.06cp/μL時(shí)，檢測(cè)到12/20（60%）的重復(fù)，Cq平均值37.12（圖2，紅色）。
 

▲ 圖2. 病毒拷貝數(shù)與Cq值的關(guān)系

結(jié)果表明，針對(duì)SARS-CoV-2 RNA的檢測(cè)，Azure Cielo™實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的最低檢測(cè)限LOD為0.625cp/μL，表明Azure Cielo™ 實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)可用于快速可靠地檢測(cè)COVID-19。

Azure Cielo™實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)

Azure Cielo™實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)來(lái)自于美國(guó)Azure Biosystems公司，配備高品質(zhì)溫度模塊，采用光纖和CMOS的檢測(cè)系統(tǒng)，高能LED的激發(fā)，提供高靈敏和可靠的數(shù)據(jù)。