naica®微滴芯片數(shù)字PCR在新冠病毒母嬰垂直傳播研究的應(yīng)用

最近，人們發(fā)現(xiàn)新冠病毒SARS-CoV-2有可能在母嬰之間進(jìn)行垂直傳播，而這種傳播的后果，無論是胎兒還是新生兒，均尚不清楚。來自法國(guó)艾克斯-馬賽大學(xué)的科學(xué)家在《Clinical Infectious Diseases》雜志上發(fā)表了一篇名為Congenital Infection of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 With Intrauterine Fetal Death: A Clinicopathological Study With Molecular Analysis 的文章，該文章是關(guān)于SARS-CoV- 2因母胎傳播而繼發(fā)胎死腹中并伴有先天性感染，胎盤和胎兒組織損傷的第一篇報(bào)道。

文中采取個(gè)案研究的方式，來自于一個(gè)SARS-CoV-2孕中期先天性感染的病例。一名孕婦在SARS-CoV-2檢測(cè)呈陽性后入院觀察。隨后檢測(cè)到胎兒只有少量運(yùn)動(dòng)，羊水正常，胎盤形態(tài)正常。第二天，患者出現(xiàn)失血，胎兒運(yùn)動(dòng)減少。在超聲檢查中未發(fā)現(xiàn)胎兒心臟活動(dòng)。在引產(chǎn)后，這對(duì)夫婦提出并同意了胎兒和胎盤的病理學(xué)檢查。后續(xù)采用免疫化學(xué)，RT-qPCR和RT-dPCR對(duì)胎兒和胎盤進(jìn)行病理學(xué)檢查和SARS-CoV-2基因組變異分析。

為了提高SARS-CoV-2基因組檢測(cè)的靈敏度，文中作者采用naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。在SARS-CoV-2病毒RNA的3個(gè)特異性區(qū)域設(shè)計(jì)引物和雙標(biāo)記探針：NI和N2為N基因，IP2為RdRP基因。均在FAM通道中檢測(cè)熒光信號(hào)，可以提高檢測(cè)的敏感性和特異性，在HEX通道中測(cè)量的人類基因被用作內(nèi)部控制來驗(yàn)證樣本的存在。

▲利用RT-dPCR技術(shù)，從陽性對(duì)照(PAC)、固定肺組織和胎盤檢測(cè)SARS-CoV-2病毒載量的2D微滴圖。(A)HEX通道的陽性微滴檢測(cè)內(nèi)源性細(xì)胞。(B)FAM通道檢測(cè)3個(gè)SARS-CoV-2靶點(diǎn)。(C)在FAM通道和HEX通道均可以檢測(cè)到內(nèi)源性細(xì)胞和SARS-CoV-2靶點(diǎn)。(D)陰性微滴

通過臨床病理學(xué)和分子水平的綜合分析，結(jié)果表明：胎盤發(fā)生組織學(xué)病變，出現(xiàn)組織細(xì)胞間炎癥和滋養(yǎng)層細(xì)胞壞死。胎兒表現(xiàn)出輕微的生長(zhǎng)限制，出現(xiàn)肝細(xì)胞損傷和含鐵血黃素沉著癥，在胎兒組織中沒有發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞，在福爾馬林固定胎盤、冷凍胎盤標(biāo)本和胎兒肺和肝樣品中均檢測(cè)到SARS-CoV-2，在福爾馬林固定胎盤組織中檢測(cè)到最高的病毒載量。

本案例中，SARS-CoV-2孕中期先天性感染，伴有子宮內(nèi)胎兒死亡，繼發(fā)于SARS-CoV-2感染的極度彌漫性胎盤損傷特征。母胎交換嚴(yán)重受損，導(dǎo)致胎兒缺氧伴心力衰竭和胎盤組織中高水平的病毒RNA。因此，在疑似SARS-CoV-2垂直傳播的病例中，應(yīng)考慮對(duì)孕婦進(jìn)行產(chǎn)科急診管理，特別是存在血小板減少癥導(dǎo)致胎兒移動(dòng)減少的情況下。

原文鏈接：https://doi.org/10.1093/cid/ciab840