血鉛、尿鉛的檢測應用方案

方案依據(jù)GBZ/T 316.1——2018血中鉛的測定第1部分:石墨爐原子吸收光譜測定法
本法的檢出限為7ug/L，定量下限為20ug/L;測定范圍為20ug/L~500ug/L。塞曼背景校正的原子吸收光譜儀相對標準偏差范圍為1.6%~2.8%(n=6)，氖燈背景校正的原子吸收光譜儀相對標準偏差范圍為1.5%~5.3%(n=6)。
酸脫蛋白-石墨爐原子吸收光譜法
原理
血液樣品（以下稱血樣）用硝酸溶液進行脫蛋白，在283.3nm波長下，用石墨爐原子吸收光譜法測定鉛含量。
儀器及試劑
具塞聚乙烯離心管，1.5mL。3旋渦混合器。
離心機，轉速大于10000r/min。
微量移液器，量程分別為20AL~200uL、100uL~1000L。
AA-1800H六燈座火焰石墨爐一體原子吸收光譜儀
硝酸:P 2o=1.42g/mL，優(yōu)級純。 硝酸溶液:1%(體積分數(shù))。
硝酸溶液:5%(體積分數(shù))。
牛血:肝素抗凝，-20℃保存，用時放至室溫搖勻。也可采用低本底人血、羊血等。本底鉛含量應低于50ug/L。
標準溶液，采用鉛單元素有證標準物質。
分析步驟
儀器操作參考條件
干燥80℃~150℃55s     灰化300℃~350℃ 20s   原子化1600℃5s   停氣清除2400℃3s
血鉛標準工作曲線系列的配制
將鉛單元素標準溶液用1%硝酸溶液稀釋成50.0ug/mL鉛標準應用液，再用1%硝酸溶液配成濃度為0ug/mL、1.25ug/mL、2.50ug/mL、5.00ug/mL、10.00ug/mL、12.501g/mL鉛標準溶液系列。另取6只10ml.容量瓶，編號為1~6號。分別加入0.40mL濃度為Oug/mL~12.50ug/mL的鉛標準溶液系列，再用牛血定容至刻度，即配制成濃度為O4g/L、50ug/L、100ug/L、200ug/L、400ug/L、500ug/L的血鉛工作曲線標準溶液系列。
樣品預處理
血鉛標準工作曲線溶液系列預處理方法:分別取0.15mL血鉛標準溶液工作曲線系列于具塞聚乙烯離心管內(nèi)，各管加入0.60mL5%硝酸溶液，立即蓋好蓋子，強力振搖，然后在旋渦混合器上振搖5min，以10000 r/min離心5min，上清液供測定。
樣品預處理方法:將冷凍血樣取出，恢復到實驗室溫度。充分振搖混勻，取出0.15mL，置于1.5mL具塞聚乙烯離心管內(nèi)，其余處理步驟同上。
樣品空白預處理方法:用采血針抽�、�.OmL水置于采血管中，振蕩，其余處理步驟同上
血鉛標準工作曲線溶液系列、樣品及樣品空白的測定
血鉛標準工作曲線溶液系列的測定:參照儀器操作參考條件，將原子吸收光譜儀調整到最佳測定狀態(tài)，取15uL上清液進樣，測定各標準系列，每個濃度重復測定3次。2~6號的吸光度值減去1號的吸光度值后，對相應的鉛濃度（ug/L）繪制工作曲線或計算回歸方程。
樣品及樣品空白的測定:用測定標準系列的操作條件測定樣品及樣品空白溶液，空白測定結果應小于檢出限。當檢測結果大于檢出限時，表明樣品在采集、運輸和存儲過程中受到污染，批量樣品應作廢。測得的吸光度值由工作曲線或回歸方程計算鉛的濃度（ug/L)。
計算
按式(1）計算血樣中鉛的濃度:
C=C0...........( 1)
式中:
C——血中鉛的濃度，單位為微克每升（u gL) ;
C0——由工作曲線或回歸方程得的血樣中鉛的濃度，單位為微克每升（ug/L)。3.7說明
尿中鉛的測定--石墨爐原子吸收法
方案依據(jù)GBZ/T 303——2018尿中鉛的測定，石墨爐原子吸收法
本法的最低檢出濃度為1.0 ug/L;定量下限為3.0 ug/L。測定范圍為3.0 ug/L~200 ug/L;批內(nèi)相對標準偏差為1.0 %～2.6%(n=6)，批間相對標準偏差為1.6%～3.9 % (n=6);加標回收率為97 %～104.1 % 。
原理
尿液樣品(以下稱尿樣）加氯化鈀基體改進劑后，在283.3 nm波長下,用石墨爐原子吸收光譜法測定鉛的濃度。
儀器及試劑
AA-1800H六燈座火焰石墨爐一體原子吸收光譜儀
微量加樣器，200 uL，1000 HL。
 
硝酸，ρ20一1.42 g/mL，優(yōu)級純。
硝酸溶液，1 %(體積分數(shù))。
基體改進劑: 0.33 g氯化鈀(優(yōu)級純)加熱微溶于10mL硝酸中，搖勻，用水稀釋至500.0 mL。貯存于棕色試劑瓶中，于冰箱內(nèi)可避光保存一年。
鉛標準溶液:采用具有國家標準物質證書號的鉛單元素溶液標準物質。
鉛標準應用液:用1%硝酸將鉛標準溶液稀釋成1.0 ug/mL的鉛標準應用溶液。
樣品及空白的處理方法
鉛工作曲線標準系列預處理方法
分別取各管標準溶液0.2mL于具塞聚乙烯離心管中加入0.2mL正常人尿，混勻后供測定。
樣品預處理方法
將酸化的尿樣從冰箱中取出，恢復到室溫后，充分搖勻。吸取0.2 mL于具塞聚乙烯離心管中加入0.2 mL氯化鈀基體改進劑,混勻后供測定。當樣品濃度超過線性范圍時需將樣品進行適當稀釋后進樣.稀釋樣品時應注意樣品、空白及標準系列處理方法應保持一致。測定結果無需計算稀釋倍數(shù)。
空白預處理方法
取0.2 mL 1 %硝酸于具塞聚乙烯離心管中加入0.2 mL氯化鈀基體改進劑,混勻后供測定。
鉛工作曲線標準系列的配制
取7只10 mL容量瓶分別加入0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.20 mL、1.60 mL、2.00 ml鉛標準應用液，各加氯化鈀基體改進劑至10 mL ,配置成0.0 ug/L、20.0 ug/L、40.0 ug/L、80.0 ug/L、120.0 ug/L、160.0 ug/L、200.0 ug/L鉛標準系列，
測定
鉛工作曲線標準系列測定
參照儀器操作條件，將原子吸收分光光度計調整到最佳測定狀態(tài)。進樣10 uL，測定各標準管的吸光度;從1~6號管的吸光度值中減去О號管的吸光度值后。以吸光度對鉛濃度(ug/L)繪制工作曲線計算回歸方程。
樣品及空白的測定
用測定標準系列的操作條件測定樣品溶液和空白溶液,由樣品的吸光度值減去空白的吸光度值，由工作曲線或回歸方程得尿樣中鉛濃度(ug/L)。
質量控制
依據(jù)GBZ/T 173，用凍干人尿鉛國家標準物質作為質量控制樣品。質控樣品的處理、測定與標準系列及樣品的處理、測定一致。在測定樣品前后以及每測定10個樣品之間，測定一次質控樣，以控制樣品檢測的準確性。
計算
按式（2）計算尿樣的鉛濃度:
C =C0×k ..............(2)
式中:
C——尿中鉛的濃度，單位為微克每升（ug/L） ;
C0——工作曲線或回歸方程得的尿樣扣除空白后鉛的濃度，單位為微克每升（ug/L) ;k ——尿樣換算成標準比重(1.020)下的濃度校正系數(shù)。
注意事項
所用的基體改進劑中的氯化鈀與鉛形成穩(wěn)定的絡合物，鉛不易在灰化過程中損失，因此灰化溫度可以提高到700 ℃~900 ℃，在此溫度下，尿樣中的大部分干擾成份被清除。
所用容器及實驗用品均需經(jīng)1:1的硝酸溶液浸泡過夜，用水及蒸餾水沖洗干凈備用。
尿樣采集時間不限，采尿樣時要脫離現(xiàn)場環(huán)境，換下工作服，搞好個人衛(wèi)生后，在潔凈的房間內(nèi)留尿，以防環(huán)境中鉛的污染。
尿樣中鉛濃度超過測定范圍時，可將工作曲線范圍提高到400.0 ug/L，按照3倍稀釋(0.2 mL尿樣,加入0.2 mL 基體改進劑加0.2 mLl%硝酸混勻)、4倍稀釋（0.2 mL 尿樣,加入0.2 mL,基體改進劑加0.4 mL1 %硝酸混勻）或5倍稀釋（0.2 mL尿樣,加入0.2 mL 基體改進劑加0.6 mLl %硝酸混勻進行測定。同時樣品、空白及標準系列處理方法應保持一致。測定結果無需計算稀釋倍數(shù)。
整個檢測過程的質量保證應按照GBZ/T 295的要求進行。
 
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