人源化CD3單抗助力T細(xì)胞藥物的開發(fā)與應(yīng)用

TCR-CD3復(fù)合體

CD3抗體的應(yīng)用
CD3抗體是第一個(gè)在臨床上應(yīng)用的單抗藥物，用于降低器官移植病人急性排斥反應(yīng)的免疫抑制劑。CD3抗體治療器官排斥反應(yīng)主要是通過4種機(jī)制：（1）“包被”作用（Coating），CD3抗體結(jié)合CD3蛋白后，包被（Coating）在T細(xì)胞表面，阻斷了T細(xì)胞與抗原提呈細(xì)胞或其他免疫細(xì)胞的相互作用，達(dá)到抑制免疫反應(yīng)發(fā)生的目的；（2）清除T細(xì)胞。CD3抗體進(jìn)入體內(nèi)后，可以通過補(bǔ)體依賴或抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用導(dǎo)致T細(xì)胞的死亡；（3）TCR表面表達(dá)下調(diào)。CD3抗體結(jié)合CD3蛋白后，導(dǎo)致TCR胞外區(qū)脫落或內(nèi)化，提高了T細(xì)胞活化的閾值，致使T細(xì)胞不能充分應(yīng)答抗原提呈作用；（4）CD3信號(hào)傳導(dǎo)。CD3抗體結(jié)合不同免疫細(xì)胞的CD3蛋白后產(chǎn)生不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)，結(jié)合致病性T細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)其凋亡，而結(jié)合調(diào)節(jié)性T細(xì)胞則導(dǎo)致其擴(kuò)增，綜合效應(yīng)是引起機(jī)體免疫抑制。

近年來，CD3雙特異性抗體（CD3-bispecific antibodies，CD3-BsAbs）是癌癥免疫治療領(lǐng)域的一種新興治療方式。CD3 BsAbs通過同時(shí)結(jié)合腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的腫瘤相關(guān)抗原和T細(xì)胞上的CD3發(fā)揮作用。CD3-BSAb將這兩種細(xì)胞類型交聯(lián)，可以形成免疫突觸，類似于天然T細(xì)胞受體（TCR）/肽-主要組織相容性復(fù)合體（MHC）復(fù)合體。這種突觸導(dǎo)致T細(xì)胞活化，從而分泌炎癥細(xì)胞因子和細(xì)胞溶解性分子，從而殺死腫瘤細(xì)胞。CD3 BsAbs的優(yōu)勢(shì)在于，無(wú)論TCR的特異性如何，任何T細(xì)胞都可以作為效應(yīng)細(xì)胞。對(duì)于這些BsAbs，TCR信號(hào)不需要TCR的抗原結(jié)合域參與，而是通過CD3啟動(dòng)。因此，CD3 BSAb可以利用所有可用的T細(xì)胞，并且不限于腫瘤特異性T細(xì)胞，這點(diǎn)與免疫檢查點(diǎn)治療的要求不同，也是其一大優(yōu)勢(shì)。

不過，CD3抗體的應(yīng)用因其明顯的副作用也受到了阻礙，例如它的免疫原性和有絲分裂潛能。人源化抗體改造是降低抗體免疫原性的有效手段。北京同立海源生物作為國(guó)內(nèi)專注基因/細(xì)胞治療GMP級(jí)上游原料生產(chǎn)企業(yè)，獨(dú)具技術(shù)優(yōu)勢(shì)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)平臺(tái)，自主研發(fā)了人源化的CD3抗體，可以用于抗體標(biāo)記、T細(xì)胞的體外活化和免疫系統(tǒng)人源化小鼠T細(xì)胞清除等科學(xué)研究。人源化抗體因其低免疫原性，將為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的認(rèn)可性和后續(xù)的成果轉(zhuǎn)化提供強(qiáng)大保證。

優(yōu)勢(shì)介紹：
人源化改造及細(xì)胞制備
北京同立海源生物采用基因重組方法，將原有CD3 單克隆抗體（克隆OKT3）做人源化改造，在保持了OKT3單抗對(duì)T細(xì)胞激活能力的前提下，最大程度上消除了鼠源性抗體的免疫原性，在此基礎(chǔ)上利用CHO細(xì)胞表達(dá)人源化改造的后抗體能更好地應(yīng)用于臨床細(xì)胞藥物的研發(fā)，在腫瘤殺傷方面發(fā)揮著重要作用。相對(duì)于其他采用雜交瘤技術(shù)制備的CD3單克隆抗體，生產(chǎn)過程中使用完全化學(xué)界定無(wú)血清培養(yǎng)基，真正做到無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物源、無(wú)任何外源因子，完全避免了傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的CD3單克隆抗體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)可能產(chǎn)生的不利影響，大大提高了產(chǎn)品的穩(wěn)定性、安全性

高安全性
安全是細(xì)胞培養(yǎng)的首要條件。CD3單克隆抗體的內(nèi)毒素水平直接影響到后期所收獲免疫細(xì)胞的內(nèi)毒素含量。由于免疫細(xì)胞制品對(duì)內(nèi)毒素具有嚴(yán)格的要求，一般內(nèi)毒素水平必須控制在5EU的水平。北京同立海源生物采用人源細(xì)胞進(jìn)行CD3單克隆抗體的生產(chǎn)，整個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)均在GMP環(huán)境中完成，無(wú)動(dòng)物源性、無(wú)外源因子，無(wú)內(nèi)毒素風(fēng)險(xiǎn)，純化及貯存過程加以嚴(yán)格的內(nèi)毒素控制，所有批次產(chǎn)品嚴(yán)格控制內(nèi)毒素含量不高于0.1 EU/μg，完全滿足免疫細(xì)胞制備的要求。

高純度
抗體純化受到抗體的生產(chǎn)體系、初始純度、親合分離介質(zhì)質(zhì)量、純化方案、儲(chǔ)存方案等諸多條件的影響。為了獲得高質(zhì)量的CD3單克隆抗體，北京同立海源生物采用自主研發(fā)生產(chǎn)的親和分離介質(zhì)，并對(duì)抗體結(jié)合、洗脫條件進(jìn)行不斷優(yōu)化，保證每個(gè)批次的CD3單克隆抗體經(jīng)HPLC檢測(cè)純度達(dá)99%。

• CD3單抗純度檢測(cè)：

高活性、高穩(wěn)定性
流式細(xì)胞術(shù)可用于檢測(cè)CD3抗體與Jurkat細(xì)胞（人外周血白血病T細(xì)胞）表面CD3 的結(jié)合活性，從而評(píng)估CD3抗體的生物學(xué)活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，北京同立海源生物的CD3抗體在低濃度100-300ng/mL時(shí)即可與Jurkat細(xì)胞有很好的結(jié)合活性。較好的細(xì)胞因子活性能更好的刺激T細(xì)胞的增殖。

批次穩(wěn)定性高，現(xiàn)貨供應(yīng)
北京同立海源生物配備GE公司生物反應(yīng)器，擁有大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)能力，能夠?qū)崿F(xiàn)CD3單克隆抗體的大量制備，滿足您隨時(shí)的訂購(gòu)需求。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、批間差異小，對(duì)基礎(chǔ)研究以及臨床級(jí)免疫細(xì)胞制備均有較好的應(yīng)用前景。

CD3是免疫細(xì)胞藥物開發(fā)中的核心原料，北京同立海源生物十余年專注細(xì)胞與基因治療（CGT）上游核心試劑原料的研發(fā)生產(chǎn)。擁有哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)蛋白質(zhì)工程平臺(tái)，采用基因重組方法，將原有CD3單克隆抗體（克隆OKT3）做人源化改造，在保持了OKT3單抗對(duì)T細(xì)胞激活能力的前提下，最大程度上消除了鼠源性抗體的免疫原性，在腫瘤殺傷方面發(fā)揮著重要作用。

在細(xì)胞和基因治療領(lǐng)域，北京同立海源生物自主開發(fā)的人源化CD3單抗（貨號(hào):GMP-TL101），已支持多家客戶的T細(xì)胞藥物申報(bào)IND。

參考資料：
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