EAE模型——實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎動(dòng)物模型操作

EAE模型-( 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎動(dòng)物模型)操作

實(shí)驗(yàn)耗材：
1）無菌陶瓷研缽1個(gè)
2）5ml玻璃注射器
3）振蕩器
4）28G一次性注射針頭
5）18G一次性注射針頭
6）1ml一次性注射器
7）一次性三通管1個(gè)
8）一次性塑料試管

實(shí)驗(yàn)周期：約2周

試劑配制：
1.少突膠質(zhì)細(xì)胞髓磷脂糖蛋白（MOG）準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備完全弗氏佐劑（CFA結(jié)核菌素（Mtb）粉末溶于不完全弗氏佐劑而成（終濃度為4mg/ml）。將100mg結(jié)核菌素粉末與不完全弗氏佐劑混合，每次加入一點(diǎn)點(diǎn)不完全弗氏佐劑，在研缽中充分研磨保證結(jié)核菌素完全懸浮。
PS:也可直接購(gòu)買即用型的完全佐劑（Chondrex cat#7001 4mg/ml ,）
2）MOG35-35：即用型-20℃保存。
3）1:1混合MOG和Mtb/CFA（終濃度為1mg/ml）。使用三通管使之混合和乳化，保存于4℃冰箱，并于24小時(shí)內(nèi)使用
2、百日咳毒素（PTX）：50μg毒素和500μl PBS做成濃度為100μg/ml體系，保存于4℃冰箱。使用時(shí)按1:100稀釋（終濃度為1μg/ml），腹腔注射200μl/只小鼠

步驟：
1、第一天：小鼠胸腹部皮下注射接種MOG和Mtb/CFA（終濃度為1mg/ml）混合液：腹側(cè)2-4個(gè)點(diǎn)，共150μl/只。再腹腔注射百日咳毒素（PTX），200μl/只小鼠
2、第三天：腹腔內(nèi)注射百日咳毒素（PTX），200μl/只小鼠。
CHO細(xì)胞實(shí)驗(yàn)—依照Hewlett et al.方法，產(chǎn)生陽性反應(yīng)（CHO簇聚生長(zhǎng)模式）所需PTX的低濃度為0.03ng/ml；依批次不同而有變 化。
腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗(yàn)：依照Wolff et al方法，在含1 μM鈣調(diào)蛋白的體系中，PTX的腺苷酸環(huán)化酶活性是9 picomoles/min/μg。依照 批次不同會(huì)有差異。
主要應(yīng)用： PTX常與MOG（35-55），PLP（139-151），PLP（178-191）等免疫肽聯(lián)合注射動(dòng)物，從而建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 （Experimental Autoimmune Encephalomyelitis，EAE）模型，即用來研究多發(fā)性硬化癥（Mutiple sclerosis，MS）的常用動(dòng)物模 型。
List labs提供三種配方形式的百日咳毒素（Pertussis toxin，PTX），分別是甘油溶液（貨號(hào)：listlabs 179），溶于緩沖液的凍干粉（貨號(hào)： listlabs 180），以及溶于純水的凍干粉（貨號(hào)：listlabs 181）。三種形式的百日咳毒素。

白喉毒素在構(gòu)建細(xì)胞特異性細(xì)胞毒性免疫毒素中可用作毒素元素。具有天然內(nèi)體逃逸機(jī)制的細(xì)菌毒素易位結(jié)構(gòu)域已被用于開發(fā)有效的非病毒載體用于基因治療。