在生物反應(yīng)器中進(jìn)行HEK293細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)

293細(xì)胞系作為常用的表達(dá)外源基因的細(xì)胞株，由于具有容易轉(zhuǎn)染，生產(chǎn)速度快，瞬時(shí)表達(dá)力強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，生物制藥企業(yè)通常利用HEK293細(xì)胞株在微載體生物反應(yīng)器中規(guī)�；�生產(chǎn)抗體類藥物。

生物制藥領(lǐng)域用HEK293細(xì)胞生產(chǎn)抗體藥物雖具有較多優(yōu)勢(shì)，但也存在缺陷，此類細(xì)胞無(wú)論是表達(dá) E1A蛋白的HEK293A 系列還是慢病毒HEK 293FT細(xì)胞都存在著細(xì)胞貼壁性弱，產(chǎn)出率低的致命缺陷。
 
這就要求我們?cè)谂囵B(yǎng)HEK293細(xì)胞時(shí)嚴(yán)格遵相關(guān)的操作規(guī)程。在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)HEK293細(xì)胞系，有以下幾個(gè)方面需要注意：

一、選擇合適的培養(yǎng)基和補(bǔ)料
培養(yǎng)基是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，HEK293原代細(xì)胞主要來(lái)源于人胚腎細(xì)胞其形態(tài)類似于上皮細(xì)胞，所選用的培養(yǎng)基一般為MEM等動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基。OPM-CD Trans293培養(yǎng)基由于不含生長(zhǎng)因子和蛋白質(zhì)也是不錯(cuò)的選擇。OPM-293 ProFeed補(bǔ)料也有提高轉(zhuǎn)染產(chǎn)物表達(dá)效果的作用，可與OPM-CD Trans293培養(yǎng)基配合使用。合適的培養(yǎng)基、補(bǔ)料是保持393細(xì)胞良好生長(zhǎng)的必要條件。

二、細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率
細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的陽(yáng)性細(xì)胞比例不僅決定著細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率同時(shí)也決定著抗體的產(chǎn)能，所以提高轉(zhuǎn)染后的陽(yáng)性細(xì)胞比例是HEK293細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。細(xì)胞轉(zhuǎn)染前要保證傳代細(xì)胞95%以上的存活率，傳代頻率大概控制在 3d/天，傳代細(xì)胞密度一般維持在3~4×10^6 cells/ mL左右轉(zhuǎn)染時(shí)可用新鮮的培養(yǎng)基稀釋到合適的細(xì)胞密度有利于提升細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。

三、細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境條件
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)毒素會(huì)嚴(yán)重阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞凋亡，作業(yè)過(guò)程中設(shè)法減少轉(zhuǎn)染載體溶液內(nèi)毒素殘留是提高細(xì)胞存活率，加快細(xì)胞生長(zhǎng)速度的重要手段之一。 另外，在細(xì)胞表達(dá)時(shí)通過(guò)生物反應(yīng)器溫度控制系統(tǒng)調(diào)整適宜的培養(yǎng)溫度，也有益于增加轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，從而提高細(xì)胞產(chǎn)物的總產(chǎn)量。

蘇州阿爾法生物提供的生物反應(yīng)器產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于抗體蛋白生產(chǎn)工藝、新藥開(kāi)發(fā)、科學(xué)研究等領(lǐng)域。罐體容量具有多種規(guī)格可供選擇，以實(shí)現(xiàn)靈活的多產(chǎn)品操作，滿足不同用戶需求，提高制造設(shè)施的利用率。針對(duì)特殊用戶，還可以定制大型不銹鋼發(fā)酵罐，細(xì)胞生物反應(yīng)器。生物反應(yīng)器采用PLC系列控制系統(tǒng)穩(wěn)定、可靠。并針對(duì)特定細(xì)胞系自動(dòng)優(yōu)化混合和傳質(zhì)，使設(shè)備在有限空間內(nèi)實(shí)現(xiàn)高效、高產(chǎn)能要求。