冷凍切片的常見問題與對(duì)應(yīng)的原因及解決方法

在冷凍切片的過程中，你是否也遇到：
切片有劃痕
切片厚度不均
組織黏在防卷板上……
想要制作一張高質(zhì)量的組織切片，不僅需要長期的反復(fù)練習(xí)，更需要借鑒前人的經(jīng)驗(yàn)。本期我們將從大家實(shí)際冷凍切片中遇見的問題著手，查找原因并給出對(duì)應(yīng)的解決辦法。
 

問題01：箱體結(jié)霜
原因：
1、切片機(jī)窗戶打開時(shí)間過長；
2、機(jī)器自身溫控性能差。

解決方案：
1、不使用機(jī)器時(shí)注意關(guān)好玻璃窗；
2、做除霜處理；
3、瑞沃德冷凍切片機(jī)制冷和溫控性能可以有效避免結(jié)霜問題，同時(shí)可設(shè)置自動(dòng)除霜和手動(dòng)除霜。

問題02：切片發(fā)黏
原因：
組織、刀片、防卷板都可能溫度過高，導(dǎo)致片子回溫濕潤。

解決方案：
1、當(dāng)機(jī)器到達(dá)設(shè)定溫度后，再制冷一段時(shí)間再切片，保證箱體內(nèi)部硬件凍透；
2、適當(dāng)延長樣本冷凍時(shí)間或者把樣本放在速凍臺(tái)快速冷凍位點(diǎn)制冷。

問題03：切片開裂，不能正常展開
原因：
1、組織過凍，脆性增加；
2、刀片或防卷板上有碎屑或者有細(xì)微缺口；
3、組織包埋不規(guī)則，有細(xì)微隆起。

解決方案：
1、調(diào)高樣本頭溫度，適當(dāng)縮短組織冷凍時(shí)間；
2、清理防卷板和刀片處，或更換刀片和防卷板玻璃面；
3、再次修片，修出平整截面再切片或重新包埋。

問題04：片子在防卷板上卷曲（進(jìn)不了防卷板）
原因：
防卷板與刀片邊沿距離不合適。

解決方案：
調(diào)整防卷板，使其細(xì)微向前移一些。

問題05：樣品剮蹭到防卷板
原因：
防卷板與刀片邊沿距離不合適。

解決方案：
調(diào)整防卷板，使其細(xì)微向前移一些。

問題06：片子有劃痕
原因：
1、刀片有缺口；
2、防卷板有缺口。

解決方案：
1、更換刀片或者側(cè)向位移換新的刀口；
2、更換防卷板玻璃面或側(cè)向位移換新的防卷板區(qū)域。

問題07：切片震顫或有雜音
原因：
1、組織與樣本托之間未冷凝穩(wěn)固；
2、刀片、刀架和樣本頭未鎖緊；
3、組織過硬且包埋不規(guī)則。

解決方案：
1、重新用包埋劑將組織與樣品托包埋冷凍；
2、檢查刀片、刀架和樣本頭是否鎖緊；
3、增加切片厚度。

問題08：切片厚度不均
原因：
1、刀架角度不合適，刀片背面有碎屑或結(jié)冰，切片速度不一致；
2、刀片和樣品頭未鎖緊；刀架未鎖緊。

解決方案：
1、通過調(diào)整刀架間隙角（出廠默認(rèn)是5°）從而調(diào)整刀片角度，清理刀片鎖緊位置和更換刀片，調(diào)整切片速度；
2、檢查刀片、刀架和樣本頭是否鎖緊。

問題09：組織粘在防卷板上
原因：
1、防卷板溫度過高或位置不合適；
2、防卷板帶靜電；
3、脂肪等組織粘在防卷板邊沿。

解決方案：
1、切片前，防卷板先冷凍一下或調(diào)整防卷板位置；
2、更換防卷板玻璃另一側(cè)試試效果；
3、清理防卷板邊沿再切片。

問題10：防卷板抬起后，片子卷曲
原因：
1、防卷板溫度過高；
2、包埋劑包埋不均勻。

解決方案：
1、切片前，防卷板先冷凍一下；
2、組織包埋的厚度和形狀盡量規(guī)則，再用毛筆輔助展片。

問題11：載玻片無法貼片
原因：
載玻片溫度偏低。

解決方案：
1、載玻片溫度升高后再貼片；
2、載玻片貼片前放置于箱體外部。