測定水產(chǎn)品中有機(jī)硒和無機(jī)硒的應(yīng)用方案

方案依據(jù)SN/T 4526--2016
GB/T 602化學(xué)試劑雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
GB 5009.93食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中硒的測定(第一法︰氫化物原子熒光光譜法)
GB/T 6682︰分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

方法原理
水產(chǎn)品中的硒以不同的化學(xué)形式存在,包括無機(jī)硒和有機(jī)硒。試樣中無機(jī)硒經(jīng)(1＋1)鹽酸水浴條件下振蕩提取﹐與有機(jī)硒分離,用氫化物發(fā)生原子熒光光譜法測定無機(jī)硒含量。有機(jī)硒含量由總硒含量減去無機(jī)硒含量得到。

儀器及試劑和材料
AFS-680原子熒光光度計,附硒空心陰極燈。
恒溫水浴振蕩器。
電熱板。
組織搗碎機(jī)。
除非另有規(guī)定,本方法所使用的試劑均為優(yōu)級純,實驗用水應(yīng)符合GB/T 6682中規(guī)定的一級水。 鹽酸(ρ—1.19 g/ mL)。
鹽酸(1＋1):吸取50 mL鹽酸緩慢加入40 ml.水中,冷卻后用水定容至100 mL。
鹽酸(2＋98):吸取2 mL鹽酸緩慢加入80 mL水中,冷卻后用水定容至100 mL。
氫氧化鈉(5 g/L):稱取5.0 g氫氧化鈉溶于水中,冷卻后用水定容至1 000 mL。
硼氫化鈉(10 g/L):稱取10.0 g 硼氫化鈉溶于氫氧化鈉中,用氫氧化鈉定容至1 o00 mL。
鐵氰化鉀(100 g/L):稱取10.0 g鐵氰化鉀溶于水中,用水定容至100 ml,搖勻。
硒標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 000 ug/mL):各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液按GB/T 602方法配制,或直接使用市售有證國家標(biāo)準(zhǔn)溶液。
硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1.0 ug/ mL):由硒標(biāo)準(zhǔn)儲備液以鹽酸(2+98)逐級稀釋而成。
環(huán)己烷。
正辛醇。
氬氣;純度≥99.99 %。

分析步驟
試樣制備
取代表性樣品約500 g,取其可食部分切碎后,用搗碎機(jī)將樣品打成漿狀,混勻,裝入潔凈容器封,標(biāo)明標(biāo)記。試樣于―18 ℃下保存。在抽樣及制樣的操作過程中,應(yīng)防止樣品受到污染。

總硒的測定
測定按GB 5009.93食品中硒的測定(第一法︰氫化物原子熒光光法)進(jìn)行。

無機(jī)硒的測定
試樣處理
稱取2.5 g試樣(精確到0.001 g)置于25 mL具塞刻度試管中,加入鹽酸(1+1)20.00 mL,并用鹽酸(1+1)定容至25 mL,混勻,置于60℃恒溫水浴中200 r/ min振蕩浸提18 h,取出冷卻至室溫,再用脫脂棉過濾。將濾液倒入分液漏斗中,加入5 mL環(huán)己烷萃取，收集水相于燒杯中。準(zhǔn)確吸4.00 mL水相于10 mL具塞刻度試管中,置于沸水浴中20 mm,取出冷卻至室溫,分別加入1.0 m鐵氰化鉀、3滴正辛醇，用水定容至10 ml,搖勻待測。
空白試驗
除不稱取試樣外,均按上述步驟進(jìn)行。

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制
分別準(zhǔn)確吸取硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1.0ug/mL)0.00 mL,0.050 mL,0.200 mL,0.400 mL,0.60 mL,1.00 mL于50 mL容量瓶中,分別加入10 mL鹽酸,5.0 mL鐵氰化鉀、3滴正辛醇,用水稀釋并定容至刻度,搖勻待測。硒標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為0、1.00、4.00、8.00、12.0、20.0（ug/l）
以鹽酸(2+98)為載流﹑硼氫化鈉為還原劑,測定空白溶液的熒光強(qiáng)度后,按順序由低到高分別測定硒系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的熒光強(qiáng)度﹐根據(jù)熒光強(qiáng)度和對應(yīng)的元素濃度繪制硒標(biāo)準(zhǔn)曲線。

結(jié)果計算
無機(jī)硒
按式(1)計算試樣中無機(jī)硒含量:
.......（1）
式中:
X₁——試樣中無機(jī)硒的含量,單位為毫克每千克mg/kg):
c₁——試樣提取液測定濃度,單位為納克每毫升(ng/mL);
C_o1——試劑空白測定濃度,單位為納克每毫升(ng/ mL)
m——試樣質(zhì)量,單位為克(g）
f ——f=25mL×10mL/4rnL。

有機(jī)硒
按式(2)計算試樣中有機(jī)硒含量:
X₂=X - X₁.…......…（2）
式中:
X₂—-—試樣中有機(jī)硒的含量,單位為毫克每千克(mg/ kg);
X——試樣中總硒含量,單位為毫克每千克( mg/kg);
X₁——試樣中無機(jī)硒的含量,單位為毫克每千克( mg/kg)。