平行生物反應器應用：基因治療中細胞培養(yǎng)規(guī)�；�挑戰(zhàn)

瞬時轉(zhuǎn)染（Transient transfection）是廣泛使用的制造方法之一，具有快速開發(fā)、靈活度高、可以生產(chǎn)多種rAAV等優(yōu)勢。其工藝開發(fā)工作集中于細胞系工程、克隆篩選、質(zhì)粒配置改進和工藝優(yōu)化上。粘附瞬時轉(zhuǎn)染（aTT）主要用于科研小規(guī)模rAAV生產(chǎn)和材料的生成，將質(zhì)粒替換為不同的目標基因，使用單個宿主細胞系就可以生產(chǎn)多個構(gòu)建體，縮短篩選和開發(fā)時間。然而，aTT工藝的可拓展性和制造一致性仍存在不少挑戰(zhàn)。使用aTT進行rAAV生產(chǎn)需要大量實驗員進行操作，勞動密集程度高，同時可能導致批次間重復性差，流程難以驗證等問題。
 

懸浮瞬時轉(zhuǎn)染（sTT）能夠在攪拌罐生物反應器中放大細胞培養(yǎng)，同時降低液體處理的要求，近年來被認為是更理想的解決方案。有研究成功開發(fā)出高表達的細胞系并成功放大至數(shù)百升的生物反應器中。

桿狀病毒表達載體系統(tǒng)（Baculovirus expression vector systems）具有利于放大擴展、相較于哺乳動物細胞平臺的體積生產(chǎn)率更高、不含動物成分等優(yōu)點。但仍存在載體蛋白比率不一致，翻譯后修飾等問題，阻礙了大規(guī)模rAAV生產(chǎn)的實施。

生產(chǎn)細胞系（Producer cell lines）系統(tǒng)被認為是成本低、穩(wěn)定性高、可拓展的生產(chǎn)平臺。其主要缺點是前期獲得穩(wěn)定的工程細胞系需要耗費大量時間和資源。隨著基因治療的商業(yè)化，市場將需要更高產(chǎn)量更低成本的產(chǎn)品，應運而生的則是可誘導生產(chǎn)細胞系（iPCL）系統(tǒng)。該系統(tǒng)利用化學誘導啟動子調(diào)控基因的表達，同時具有可拓展、穩(wěn)定性高、產(chǎn)量高的優(yōu)勢。誘導表達同時還可以減少基因表達的副作用，如細胞死亡、生產(chǎn)延遲等。利用該系統(tǒng)rAAV的生產(chǎn)可以分為細胞生長和病毒載體產(chǎn)生階段。細胞生長階段可以采用高密度細胞培養(yǎng)工藝來增加生物量。

有研究表明，使用小體積平行生物反應器可以借助高通量與平行性的優(yōu)勢來做DOE實驗，幫助快速篩選合適培養(yǎng)基、微載體以及工藝參數(shù)。也有團隊通過平行生物反應器開展灌流工藝獲得了更高的單位體積產(chǎn)量。
 

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