根據(jù)前文介紹,初步拉制出一根玻璃電極后,就要根據(jù)其尖端形狀及具體要求進(jìn)一步精細(xì)調(diào)整參數(shù)以滿足需求。
P1000調(diào)整的原理與P97相同,下圖再次貼出供參考。
用于顯微注射、胞內(nèi)記錄等的電極較為細(xì)長,通常會單步拉制,其PULL和VEL參數(shù)的值一般比較大,可以用上圖直接調(diào)整。而用于膜片鉗的電極相對比較短粗,一般選擇多步拉制,此時參數(shù)的調(diào)整方法會略有不同。
主要介紹一下用于膜片鉗的電極拉制技巧。
這種電極一般會由3至5步進(jìn)行拉制,步數(shù)越多,電極頸部越短,尖端也相對更粗,阻抗變小,需要根據(jù)具體情況來選擇。此時我們會用VEL這項參數(shù)來控制具體的拉制步數(shù),VEL通常會在20左右,根據(jù)鉑金片、拉制儀及玻璃管體質(zhì)不同也會略有變化,而PULL在這里會選擇0。
以4步拉制進(jìn)行舉例說明,Heat值通過Ramp測試進(jìn)行確定,TIME(或DELAY)和PRESSURE暫按照CookBook中的推薦參數(shù)保持不變(詳見上篇文章)。
假如VEL這次選擇了25,拉制完成后未操作設(shè)備時,可以在屏幕下方看到結(jié)果提示。其中第一行表示該程序共循環(huán)了4次,第二行表示這次的電極在程序的第1行結(jié)束,因?yàn)檫@個程序一共只寫了1行,所以這就代表本次拉制用了4步。
此時應(yīng)該將VEL改為24,重新拉制,記錄步數(shù),并依次遞減,直到有一個VEL使其步數(shù)變?yōu)?,假設(shè)該VEL為22。然后VEL再從25依次遞增,直到有一個VEL使步數(shù)變?yōu)?,假設(shè)為26。那么能使該電極拉制步數(shù)為4的VEL分別有23、24、25,選擇中間那個值即可,如果得到的VEL只有兩個,則取較大那個值。
確定了VEL后,在程序中將4步分為4行分別設(shè)置出來,在P1000中,可以在Line這一項下面點(diǎn)擊“x1”,將其修改為“x3”,如下圖所示,表示這一行重復(fù)3次,然后在第二行按照第一行的參數(shù)抄上去,再根據(jù)上文表格中的調(diào)整方法對最后一行進(jìn)行調(diào)整,最后一行的參數(shù)會直接影響電極尖端的形狀,而前面3行主要影響頸部形狀。在P97中,調(diào)整方法同理,只是P97需要將所有行全部寫出,無法單獨(dú)設(shè)置某行進(jìn)行重復(fù)。
電極拉制參數(shù)的設(shè)置主要就是這些,更加詳細(xì)的內(nèi)容,比如各個參數(shù)的具體含義及更加精確的影響等細(xì)節(jié)部分可以閱讀隨包裝附帶的說明書和Cookbook進(jìn)行了解。