PALL超濾方案在蛋白濃縮應(yīng)用中的選擇指南

蛋白濃縮小幫手，PALL超濾方案選擇指南

一提起蛋白質(zhì)濃縮、更換緩沖液，我們都會(huì)想起超濾。這是一種我們都很熟悉的膜分離技術(shù)。它可用來(lái)分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法的最大特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，只需要濃縮離心管和離心機(jī)，即可圓滿完成我們的任務(wù)。

與層析、透析等方法相比，超濾對(duì)被處理的分子更加溫和。它不需要有機(jī)萃取，就不會(huì)導(dǎo)致蛋白變性。這種方法非常高效，可同時(shí)濃縮和純化分子。操作可在低溫（比如冷庫(kù)）下進(jìn)行。另外，快速、便宜，也是許多人青睞它的原因。

濃縮離心管的操作很簡(jiǎn)單。選擇適當(dāng)?shù)臐饪s離心管，加入待處理的樣本，按照離心管的指示進(jìn)行離心操作，最后回收截留的樣本。在離心力的作用下，溶液中的小分子溶質(zhì)和溶劑透過(guò)超濾膜，被收集在濾過(guò)液收集瓶中，而大分子溶質(zhì)被超濾膜截留在濃縮離心管中。這種分離的主要依據(jù)是分子大小，但分子形狀和電荷等其他因素也會(huì)有影響。

一般來(lái)說(shuō)，超濾的回收率可達(dá)90%以上。樣本損失大多是由于濾膜表面和容器表面的非特異性吸附引起的。因此，選擇口碑好、高品質(zhì)的濃縮離心管非常重要。PALL作為全球領(lǐng)先的過(guò)濾企業(yè)，提供了多種濃縮離心管，可對(duì)50 μl到60 ml的樣本進(jìn)行高效的濃縮和脫鹽。它配備了Omega（改良的聚醚砜）膜，確保低的非特異性吸附和高的回收率。當(dāng)然，這個(gè)的前提是你選對(duì)了濃縮離心管。

▍按體積

PALL實(shí)驗(yàn)室提供了4個(gè)系列的濃縮離心管，適合處理不同體積的樣本。你可以根據(jù)你的樣本量來(lái)選擇。不過(guò)，如果樣本濃度低體積大，可以選擇較小容積的濃縮離心管多次重復(fù)加樣離心。

▍選擇適當(dāng)?shù)慕亓舴肿恿浚∕WCO）

一旦樣本體積確定，下一步就是選擇適當(dāng)?shù)腗WCO。對(duì)于蛋白質(zhì)而言，建議所選濾膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3。通常，截留孔徑越小，流速越慢，但截留比例更大。因此，如果流速是主要的考慮因素，建議選擇MWCO為1/3的濾膜；如果重點(diǎn)考慮截留比例，那么最好選擇更致密的膜。

友情提示一下，超濾膜對(duì)分子的截留是由多個(gè)因素決定的。在截留分子量之外，你還有必要考慮分子形狀、電荷、樣本濃度、樣本組成及操作條件。也許，線性的DNA分子溜走了，而球狀的分子卻被保留下來(lái)。總之，根據(jù)下表來(lái)選擇MWCO就基本沒錯(cuò)了。為了防止大家拿錯(cuò)管子，PALL實(shí)驗(yàn)室還貼心地將不同MWCO的濃縮離心管設(shè)置成不同的顏色，以方便識(shí)別。

核酸應(yīng)用的MWCO選擇

蛋白應(yīng)用的MWCO選擇

病毒應(yīng)用的MWCO選擇

對(duì)于1L樣品處理，切向流超濾系統(tǒng)會(huì)助力您的研究。PALL實(shí)驗(yàn)室Minimate EVO 切向流超濾系統(tǒng)是設(shè)計(jì)用來(lái)進(jìn)行高度可靠的1L樣品換液或者濃縮。新的切向流超濾系統(tǒng)增加了下游的壓力表來(lái)使計(jì)算跨膜壓力成為可能, 允許更大的用戶控制和驗(yàn)證. 除此之外，Minimate EVO 切向流系統(tǒng)升級(jí)了磁力攪拌功能，更加堅(jiān)固的管路和連接，更加容易安裝和運(yùn)行。

▍濃縮

這是大家都很熟悉的應(yīng)用。超濾可很方便地濃縮經(jīng)過(guò)稀釋的蛋白質(zhì)或DNA/RNA樣本。它很溫和，不會(huì)打斷長(zhǎng)達(dá)100 kb的DNA，也不會(huì)導(dǎo)致蛋白酶活的損失，同時(shí)也很高效，回收率通常高于90%。通過(guò)膜預(yù)處理（鈍化）可以提高低濃度蛋白的濃縮效率。稀釋蛋白質(zhì)溶液的濃縮是一種廣泛使用的應(yīng)用。 稀釋 (<10 µg/mL) 蛋白質(zhì)溶液的回收率通常不是定量的。在濃縮稀蛋白質(zhì)溶液之前對(duì)設(shè)備進(jìn)行預(yù)處理（鈍化）可以提高回收率。

▍脫鹽和緩沖液交換

超濾帶來(lái)了一種方便而高效的方法，可去除和交換溶液中的鹽、去除變性劑、分離復(fù)合分子、去除低分子量組分，或者快速改變離子或者pH環(huán)境。比如在用兩種或兩種以上的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切時(shí)，有時(shí)找不到通用的酶切緩沖液，就可以借助濃縮離心管，更換緩沖液。

▍組分分離

當(dāng)然，超濾無(wú)法完全分離兩種分子量接近的分子。為了有效分離，待分離分子的分子量至少要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10X）。對(duì)于PCR產(chǎn)物的純化和回收，超濾就很適合。PCR反應(yīng)混合物里含有多種鹽、游離的核酸、甘油、蛋白和引物，因此大多數(shù)的下游應(yīng)用都要求對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行某種純化。超濾的方法快速，操作少，產(chǎn)率高，也不損傷DNA。

最后提醒一下，對(duì)于高通量超濾應(yīng)用，PALL實(shí)驗(yàn)室還提供各種微孔濾板助力您的研究。為您的科研保駕護(hù)航。歡迎聯(lián)系PALL實(shí)驗(yàn)室索取免費(fèi)樣品和下載技術(shù)資料。