正確更換細(xì)胞培養(yǎng)基類(lèi)型的情況分析與方法介紹

選擇一種合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是每個(gè)實(shí)驗(yàn)猿的必get技能。不同類(lèi)型的培養(yǎng)基可以支持同一種細(xì)胞的生長(zhǎng)，怎么選擇最佳款？假如自己的培養(yǎng)基剛好用完了，可以借別人的培養(yǎng)基用用嗎？剛買(mǎi)了細(xì)胞，能繼續(xù)使用以前剩余的培養(yǎng)基嗎？

間充質(zhì)干細(xì)胞可以用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加常規(guī)血清培養(yǎng)嗎？

間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)條件嚴(yán)格，對(duì)使用的血清和添加物都非常敏感，并非單純的DMEM或者F12等基礎(chǔ)培養(yǎng)基加常規(guī)血清所能替代。所以在培養(yǎng)細(xì)胞前，需要考慮該細(xì)胞培養(yǎng)是否需要添加特殊的成分，并且要做足預(yù)實(shí)驗(yàn)，選取最適合細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)體系。

如賽業(yè)Oricell^®提供的各類(lèi)干細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基，經(jīng)16年干細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的篩選優(yōu)化，培養(yǎng)基添加了適合干細(xì)胞生長(zhǎng)的優(yōu)級(jí)胎牛血清，以及干細(xì)胞相關(guān)生長(zhǎng)因子和非必須氨基酸能滿(mǎn)足滿(mǎn)足干細(xì)胞傳代增殖生長(zhǎng)中需要的特殊養(yǎng)分。
 

細(xì)胞復(fù)蘇后換了一種培養(yǎng)基，影響大嗎？

短期內(nèi)接觸不同培養(yǎng)基對(duì)絕大部分細(xì)胞來(lái)講影響并不大。比如，我們?nèi)粘９ぷ髦型瑫r(shí)操作的細(xì)胞有很多，如果需要同時(shí)復(fù)蘇多株細(xì)胞，用同一種培養(yǎng)基洗滌是完全沒(méi)有問(wèn)題的，但是長(zhǎng)期培養(yǎng)就不行了。

我們培養(yǎng)的細(xì)胞長(zhǎng)期適應(yīng)了某一種培養(yǎng)體系，代謝已經(jīng)有了適應(yīng)性，冒然更換培養(yǎng)基可能會(huì)對(duì)細(xì)胞形態(tài)、增殖和蛋白表達(dá)產(chǎn)生影響。不同廠家的培養(yǎng)基，即使宣稱(chēng)同某一個(gè)細(xì)胞適用，配方也略有差異。細(xì)胞庫(kù)不同，建系的培養(yǎng)信息不同，一般廠家會(huì)建議使用自供的配套培養(yǎng)基以獲得理想的培養(yǎng)效果。所以，某一培養(yǎng)體系下的某一株細(xì)胞表現(xiàn)型讓我們滿(mǎn)意，如果不是實(shí)驗(yàn)必要，就不要輕易更換培養(yǎng)基種類(lèi)。
 

不同培養(yǎng)基養(yǎng)同一種細(xì)胞，形態(tài)不一樣正常嗎？

這種情況是正常的。如上所述，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)條件發(fā)生改變時(shí)，細(xì)胞的性質(zhì)會(huì)發(fā)生變化。
 

特殊情況下真必要更換培養(yǎng)基，該如何正確操作呢？

① 在不確定新培養(yǎng)基是否合適細(xì)胞生長(zhǎng)的情況下，實(shí)驗(yàn)前預(yù)先“保種”。

② 直接替換可能會(huì)造成細(xì)胞死亡，建議逐步進(jìn)行，密切觀察細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)和形態(tài)，讓細(xì)胞安全度過(guò)“適應(yīng)期”。

嘗試使細(xì)胞慢慢適應(yīng)新培養(yǎng)基

▷  以1:2的比例傳代到新培養(yǎng)瓶中。

▷ 如果細(xì)胞形態(tài)一致，傳代培養(yǎng)下一代細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞1:2分配，培養(yǎng)基采用1:3的比例（25%原培養(yǎng)基，75%新培養(yǎng)基）。

▷ 如果細(xì)胞形態(tài)一致，傳代培養(yǎng)下一代細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞1:2分配，培養(yǎng)基采用1:7的比例（12.5%原培養(yǎng)基，87.5%新培養(yǎng)基）。

▷ 如果細(xì)胞形態(tài)一致，傳代培養(yǎng)下一代細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞1:2分配，培養(yǎng)基全部換新培養(yǎng)基。

有時(shí)候傳一代不能真實(shí)反映細(xì)胞適應(yīng)了新培養(yǎng)環(huán)境，最好是每進(jìn)行一次更換多傳個(gè)一兩代。

③ 更換培養(yǎng)基后優(yōu)先使用同品牌、同等級(jí)、同批次的血清，或者預(yù)篩選合適的血清。
 

若已經(jīng)儲(chǔ)備了昂貴的胎牛血清，想自行配置培養(yǎng)基又該如何操作呢？

① 詢(xún)問(wèn)廠家該細(xì)胞推薦的培養(yǎng)體系，如ATCC來(lái)源細(xì)胞可直接查詢(xún)?cè)摷?xì)胞的培養(yǎng)條件介紹和正常形態(tài)。
② 翻閱文獻(xiàn)配方，要不要添加其他因子之類(lèi)的特殊成分，但要注意該文獻(xiàn)的研究條件是否與你實(shí)驗(yàn)相符。
③ 配制幾種不同類(lèi)型的培養(yǎng)基，使用同一批次細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比，觀察形態(tài)差異�；蛸�(gòu)買(mǎi)少量其他成品化培養(yǎng)基，與自己配制的進(jìn)行對(duì)比，觀察形態(tài)差異。
④ 現(xiàn)行條件下的細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，可以適當(dāng)增加血清比例。
 

賽業(yè)OriCell^®的培養(yǎng)基產(chǎn)品怎樣配制？

完全培養(yǎng)基產(chǎn)品分為非即用型和即用型兩類(lèi)，可按需選用。

非即用型
按比例分裝，使用時(shí)只需將基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、因子等全部混合即可。需要注意，部分成分體積較小、濃度較高，在運(yùn)輸、凍融過(guò)程可能析出或粘附在管壁、管蓋上。配之前，請(qǐng)務(wù)必離心后，吹打混勻再吸取。最好在吸取后使用培養(yǎng)基洗滌裝因子的管內(nèi)壁，確保沒(méi)有成分損失。

另外，有些成分析出后較難復(fù)溶，如L-谷氨酰胺、ITS等，可在37℃水浴內(nèi)震蕩或者吹打溶解。即使還有少量小顆粒無(wú)法溶解，請(qǐng)直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，成分濃度低時(shí)較易溶解。

即用型
添加了更穩(wěn)定的添加物，省去分裝操作，即開(kāi)即用。