免疫組化技術專題第5期：抗原修復液PH值、溫度和時間的選擇

通過免疫組化技術專題前幾期的內容，我們知道常規(guī)石蠟切片標本做免疫組化實驗是需要做抗原修復，這就要用到抗原修復液，因為抗原修復液會直接影響抗原修復效果，本期就跟大家一起探討抗原修復液的PH值、溫度和時間等，該如何選擇。

抗原修復液的pH值的選擇
1、首先我們知道沒有一種抗原修復液能適合于所有的抗體，因為不同pH的抗原修復液其pH比化學成分對抗原修復起到作用更大，雖然多數(shù)抗體在抗原修復液全范圍pH均能使抗原決定簇進行有效修復，但針對性選擇不同pH的修復液，效果會更佳。常見抗原修復液如下：

2、常用的0.01mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)對大多數(shù)抗原來說并不是最好的修復液，如進行 ER染色時，用pH7.0比pH6.0要好。

總體看：大部分組織抗原適合的修復液應接近活體細胞的pH(7.0~7.4)。

抗原修復液的溫度和時間選擇
相較于修復液的種類和pH，對抗原修復影響更大的因素是修復液的溫度和時間。建議溫度保持在95℃作用時間為15~20分鐘。反之溫度或時間不夠會使染色強度大幅度減弱，甚至呈現(xiàn)陰性結果，影響切片結果的診斷。

溫馨提醒
染色失敗應主要從抗體質量及操作中找原因。光密度值0.03以下在光鏡下看不到棕色顆粒，這些小數(shù)值的出現(xiàn)可能是顯色液中 DAB在背景中沉著所致。

石蠟切片首選
瑞沃德輪轉式（石蠟）切片機S71

​​​​​​​
【參考文獻】
病理技術大講堂1001問-病理技術操作疑難點解惑答疑. 席越，陳軍主編.人民衛(wèi)生出版社