蛋白酶k在DNA提取中的作用及其保存方法
蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。從林伯氏白色念球菌（tritirachiumalbumlimber）中純化得到。蛋白酶k，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶k在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應(yīng)用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶k的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)（pH4-12.5）均有活性。值得注意的是，蛋白酶k在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),提高雜交信號(hào).但蛋白酶k的濃度過高、消化時(shí)間過長(zhǎng)或孵育溫度過高時(shí),都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶k的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達(dá)到理想的染色效果。
在生物相關(guān)的領(lǐng)域當(dāng)中，經(jīng)常需要對(duì)DNA進(jìn)行提取分析，這樣就可以快速有效地判斷生物種類，還可以更深入地對(duì)基因組成進(jìn)行研究，而這類研究當(dāng)中非常關(guān)鍵的一步就是從細(xì)胞當(dāng)中提取出DNA。要知道DNA處在細(xì)胞核當(dāng)中，如果采取簡(jiǎn)單粗暴的手段來破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，也會(huì)同時(shí)破壞了更加脆弱的DNA結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致研究無法繼續(xù)進(jìn)行下去。而有了蛋白酶k的幫助，就能有效分解細(xì)胞當(dāng)中的所有蛋白質(zhì)，從而把細(xì)胞核里面的DNA釋放出來，而且結(jié)構(gòu)完全不會(huì)受影響。提取出來的DNA不但能夠保持完整性，而且還保持了生命的活性，能夠通過簡(jiǎn)單的方式進(jìn)行增殖。
那么如何才能更好的保存蛋白酶k呢？
只要將蛋白酶k保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，就能有效保證12個(gè)月。而使用時(shí)也要注意，孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí)；理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。
以上為大家介紹的就是蛋白酶k在DNA提取中的作用，有了這種技術(shù)，也就可以更方便更準(zhǔn)確地進(jìn)行生物基因領(lǐng)域的研究。目前這種技術(shù)也進(jìn)入到了實(shí)際的生產(chǎn)當(dāng)中，在遺傳育種以及疾病治療當(dāng)中都發(fā)揮了重要的用途。
在生物相關(guān)的領(lǐng)域當(dāng)中，經(jīng)常需要對(duì)DNA進(jìn)行提取分析，這樣就可以快速有效地判斷生物種類，還可以更深入地對(duì)基因組成進(jìn)行研究，而這類研究當(dāng)中非常關(guān)鍵的一步就是從細(xì)胞當(dāng)中提取出DNA。要知道DNA處在細(xì)胞核當(dāng)中，如果采取簡(jiǎn)單粗暴的手段來破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，也會(huì)同時(shí)破壞了更加脆弱的DNA結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致研究無法繼續(xù)進(jìn)行下去。而有了蛋白酶k的幫助，就能有效分解細(xì)胞當(dāng)中的所有蛋白質(zhì)，從而把細(xì)胞核里面的DNA釋放出來，而且結(jié)構(gòu)完全不會(huì)受影響。提取出來的DNA不但能夠保持完整性，而且還保持了生命的活性，能夠通過簡(jiǎn)單的方式進(jìn)行增殖。
那么如何才能更好的保存蛋白酶k呢？
只要將蛋白酶k保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，就能有效保證12個(gè)月。而使用時(shí)也要注意，孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí)；理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。
以上為大家介紹的就是蛋白酶k在DNA提取中的作用，有了這種技術(shù)，也就可以更方便更準(zhǔn)確地進(jìn)行生物基因領(lǐng)域的研究。目前這種技術(shù)也進(jìn)入到了實(shí)際的生產(chǎn)當(dāng)中，在遺傳育種以及疾病治療當(dāng)中都發(fā)揮了重要的用途。
標(biāo)簽：
蛋白酶k
- 細(xì)胞因子IL-23信號(hào)通路原理及在自免藥物開發(fā)上的應(yīng)用
- 多能干細(xì)胞的歷史及在臨床上的應(yīng)用
- 國(guó)內(nèi)干細(xì)胞相關(guān)政策梳理匯總及分析
- 巨噬細(xì)胞在不同疾病下的功能變化及其激活和分化指南
- 文獻(xiàn)解讀：GSK3調(diào)控信號(hào)影響牛骨骼肌纖維/脂肪生成祖細(xì)胞的成脂分化
- 多能干細(xì)胞在研情況、研究?jī)?yōu)勢(shì)及相關(guān)細(xì)胞因子應(yīng)用
- IPSC化學(xué)重編程技術(shù)與傳統(tǒng)重編程技術(shù)的區(qū)別及優(yōu)勢(shì)
- 細(xì)胞因子IL-17在靶向藥物及自身免疫性疾病中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)
- MCE教師節(jié)直播:細(xì)胞凋亡的機(jī)制、標(biāo)志物與檢測(cè)方法
- 百螢SO Green 520WS單線態(tài)氧探針促銷，買即送京東卡
- 中喬新舟開學(xué)特惠活動(dòng)：細(xì)胞系5折無需捆綁輕松購(gòu)
- 上海逐典生物參展2024 IDC第三屆新藥研發(fā)影響力大會(huì)
- 耐思推出細(xì)胞培養(yǎng)新品耗材，基質(zhì)膠試用裝等你來領(lǐng)
- MCE 第三屆細(xì)胞攝影大賽開啟，多種好禮等你拿
- 博鷺騰CCK-8檢測(cè)試劑盒新品上市,多款試劑可免費(fèi)試用
- 中喬新舟示蹤細(xì)胞限時(shí)送套餐包，評(píng)論集贊贏凍存液
Copyright(C) 1998-2024 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com