兔單克隆抗體高親和力策略

多年前，有人提出兔的內臟相關淋巴組織(GALT)，特別是闌尾和圓球囊等結構與鳥的法氏囊同源。兔闌尾與雞法氏囊具有相同的功能，它們淋巴結和生發(fā)中心(GC)結構相似，B細胞V_H序列早期多樣化的過程類似，都是通過模板化的基因轉換和非模板化的體細胞超突變實現(xiàn)的。兔子和雞一樣，主要B淋巴細胞群在生命早期產(chǎn)生，廣泛多樣化，并通過外圍細胞的自我更新維持。兔闌尾與雞法氏囊中V區(qū)基因多樣化開始的時間不同。雞法氏囊開始于胚胎發(fā)育時期，帶有V_H和V_L基因重排的B淋巴細胞到達法氏囊，在那里發(fā)生單個V_H和V_L重排的多樣化。雞B淋巴細胞中V區(qū)序列的多樣性是通過模板基因轉換機制實現(xiàn)的�；�因轉換在孵化前開始，孵化后繼續(xù)，這時一些非模板的體細胞突變也會發(fā)生。

兔V區(qū)基因多樣化開始于出生后2周左右。兔的V_H基因數(shù)量有限，在GALT中通常會重排以產(chǎn)生多種V_H區(qū)域結構，V_H基因重排后V_H序列發(fā)生一個或多個基因轉換事件，與此同時發(fā)生與基因轉換頻率相似的體細胞超突變，以進一步實現(xiàn)V_H基因的多樣性。體細胞超突變發(fā)生在B淋巴細胞生發(fā)中心(GC)已表達的抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)（V區(qū)）的編碼序列上，可進一步改善生發(fā)中心的抗體親和力。對6周齡兔闌尾研究發(fā)現(xiàn)，V_Hla2重排的改變主要是由基因轉換引起的，堿基變化的頻率與體細胞高突變序列相似，G堿基比C堿基“突變”更頻繁(17：5)， A堿基比T堿基“突變”更頻繁(6：4)。

多樣化對抗原的依賴性
一些研究者認為初級基因組發(fā)育是抗原獨立的。在雞的法氏囊中V基因多樣化階段不依賴抗原，但幼年兔闌尾中的V_H多樣化是在抗原/超級抗原存在的情況下發(fā)生的，通過與B細胞受體(BCR)結合位點(抗原特異性)的特異性相互作用，或者通過主要涉及V_H骨架區(qū)(FR)的超抗原樣相互作用實現(xiàn)初級和次級免疫系統(tǒng)的發(fā)育。

兔的B細胞陽性選擇
除了V_H區(qū)多樣性外，年幼兔闌尾的GC中似乎也發(fā)生了B細胞的陰陽性選擇。V_H1a2基因通常在野生兔的大多數(shù)B淋巴細胞中重排。當闌尾中生發(fā)中心（GC）出現(xiàn)時，B淋巴細胞產(chǎn)生具有V_Ha2樣序列的表面Ig，可在缺乏V_H1基因的情況下與抗a2抗體發(fā)生反應。在V_H基因多樣性過程中，類基因轉換的變化導致a2表位的產(chǎn)生，同時進行基于V_H(FR)序列的B細胞陽性選擇。低親和性自身抗原是原代和繼代B細胞存活的陽性選擇來源。無論是內源性還是來自食物和微生物菌群的抗原或超級抗原，通過與V_H FR結構的相互作用，影響或驅動特定B細胞的選擇性擴增。

兔VH序列的內在熱點
基因轉換是通過CDRl和CDR2的不同組合產(chǎn)生多樣性的一種有效機制，這種機制隨機性更小，引入有害變化的概率更低。CDR中固有的超突變熱點也許有助于將突變集中到可能影響結合位點結構和特異性抗原親和力的位點上。

兔V_H1基因CDRl和CDR2中的Ser密碼子均為AGY型，而非TCN型，說明兔V_H具備與人和小鼠相似的內在超突變熱點。人類和小鼠V區(qū)許多主要的內在熱點涉及到絲氨酸密碼子AGC或AGT (AGY)。在兔種系V_H1的3個常見等位基因異型al、a2和a3中，也觀察到CDR中AGY而不是TCN絲氨酸密碼子的偏好。盡管兔V_H序列最初的多樣性可能涉及類基因轉換，但種系V_H1序列中絲氨酸密碼子的分布與報道的功能性人類V_H基因相似。兔的V_H1基因只有CDRl和CDR2中有AGY絲氨酸密碼子。在FRl和FR3中發(fā)現(xiàn)TCN絲氨酸密碼子，在FR3中又發(fā)現(xiàn)一個AGY。CDR中的AGY密碼子可能是點突變的潛在位點。
 
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參考文獻
Mage RG. Diversification of rabbit VH genes by gene-conversion-like and hypermutation mechanisms[J]. Immunol Rev, 1998, 162: 49-54.