PCR擴(kuò)增反應(yīng)的步驟和影響因素分析

1、高溫變性：模板DNA經(jīng)加熱至95℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；

2、低溫退火：模板DNA與引物的復(fù)性，模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；

3、適溫延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下，以核苷酸為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
 

影響擴(kuò)增的因素：

1、由于各種原因，造成的PCR擴(kuò)增體系中出現(xiàn)了非目的檢測(cè)樣本本身的模板，使得PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽性

2、操作錯(cuò)誤或者誤差造成的模板間交叉污染

3、PCR試劑的污染

4、PCR實(shí)驗(yàn)器材的污染

5、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的氣溶膠污染