細胞傳代解決方案及注意事項

細胞傳代

大部分來自實體組織器官的細胞是貼壁生長的，它們在機體內，也是與其他細胞或細胞外基質結合的。
在貼壁的過程中，細胞首先分泌細胞外基質，這種細胞外基質黏附在支持物的表面（如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿的底面）。細胞通過其表面的黏附因子與這些細胞外基質結合。所以細胞貼壁與否與細胞本身分泌細胞外基質的能力以及細胞本身表達的黏附分子的數量有關，也與培養(yǎng)皿壁的表面結構有關。



但細胞將培養(yǎng)瓶底部占滿時，需要采用細胞消化的方法將細胞從細胞培養(yǎng)瓶上剝落，傳代轉移到其他培養(yǎng)器皿中繼續(xù)培養(yǎng)，此時如何高效收獲細胞，如何提高細胞回收率成為重中之重。總擔心遺漏了角角落落的細胞，或是用力過猛損害細胞健康？總是擔心刮刀蹭到瓶口導致污染？總是害怕移液時撞到瓶子移液不準？不用擔心，耐思來助力！


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傳代密度過高

一旦細胞養(yǎng)太久至融合度過高（>90%）才傳代，容易使細胞產生老化現象，甚至是堆疊，再消化細胞時不易吹打成單顆細胞，即便再重新傳代，細胞也無法回到原本的特性。（如：單層細胞，沒長滿就發(fā)生堆疊現象）。

解決方案

盡量避免融合度過高，鏡下觀察融合度約達到80%即可傳代。

細胞融合度：在細胞培養(yǎng)中指的是細胞在培養(yǎng)表面（培養(yǎng)皿/瓶）所占的比例。

傳代密度過低

貼壁培養(yǎng)的細胞，若細胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開始傳代，在傳代接種細胞密度過低，細胞間距離太遠，就無法在細胞間產生黏附及通信作用，幫助信號傳導并活化細胞；總體細胞量不足，分泌的生長因子濃度會不足以產生利于生長的微環(huán)境，以上皆會造成增殖速度遲緩或細胞死亡。

解決方案

細胞傳代時，要進行準確的細胞計數，確保接種的密度。

如何確定細胞的正確初始接種密度? 

美國細胞庫（ATCC）建議各類不同細胞株接種密度：