THUNDER Imager活細(xì)胞成像系統(tǒng)應(yīng)用紀(jì)要：健康卵母細(xì)胞發(fā)育

模式生物黑腹果蠅在遺傳學(xué)和發(fā)育生物學(xué)中用于研究遺傳的基本機(jī)制。發(fā)育生物學(xué)研究的一項(xiàng)重點(diǎn)工作是鑒定和表征對(duì)生殖健康至關(guān)重要的基因，包括減數(shù)分裂過程中的染色體分離以及其他有助生成健康卵母細(xì)胞的過程^[1-3]。
減數(shù)分裂同源物之間的聯(lián)會(huì)復(fù)合物（SC）或聯(lián)會(huì)的形成對(duì)于交換和染色體分離至關(guān)重要^[3]。人們對(duì)SC組裝如何啟動(dòng)所知甚少，僅知道可能在確保同源物之間的聯(lián)會(huì)以及控制雙鏈分離和交叉形成方面起到關(guān)鍵作用。對(duì)果蠅聯(lián)會(huì)的遺傳要求的研究表明，有3個(gè)時(shí)間上和遺傳上不同的聯(lián)會(huì)啟動(dòng)階段。這些是僅在著絲粒處觀察到聯(lián)會(huì)的早期偶線期卵母細(xì)胞、SC在幾個(gè)常染色位點(diǎn)啟動(dòng)的中期偶線期卵母細(xì)胞，以及SC在更多依賴于Kleisin樣蛋白C(2)M的位點(diǎn)啟動(dòng)的晚期偶線期卵母細(xì)胞^[3]。
 

研究卵母細(xì)胞的挑戰(zhàn)

由于光散射產(chǎn)生的霧面或離焦模糊，較厚的標(biāo)本（例如卵母細(xì)胞）難以使用寬場(chǎng)熒光顯微鏡成像。位于標(biāo)本深處的待觀察結(jié)構(gòu)可能會(huì)被霧面遮擋。

所用方法

對(duì)卵巢中位于早期階段的黑腹果蠅卵母細(xì)胞進(jìn)行成像。DNA被標(biāo)記為青色，卵母細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白，著絲粒被抗CENP-A抗體免疫標(biāo)記并顯示為白色，而C(2)M凝聚蛋白標(biāo)記為洋紅色。使用配備63倍1.4數(shù)值孔徑（NA）物鏡的THUNDER Imager活細(xì)胞成像系統(tǒng)對(duì)卵巢進(jìn)行大約13μm深度的成像。獲取最大亮度投影并采用Instant Computational Clearing（ICC）。
 

所獲結(jié)果

圖1所示為使用THUNDER Imager活細(xì)胞成像系統(tǒng)采集的卵母細(xì)胞圖像。

圖1：經(jīng)ICC處理的早期階段果蠅卵巢的最大亮度投影圖像，青色表示DNA，綠色表示卵母細(xì)胞，白色表示著絲粒，品紅色代表凝聚蛋白。圖片來(lái)自美國(guó)新澤西州皮斯卡塔韋羅格斯大學(xué)瓦克斯曼微生物研究所INSPIRE博士后研究員Jessica Fellmeth博士。

THUNDER Imager 3D Live Cell 3D 活細(xì)胞培養(yǎng)顯微成像系統(tǒng)