燕窩中的二氧化硫、亞硫酸鹽檢測(cè)的應(yīng)用方案

引言：
曾有媒體曝光，部分不法商家為了讓燕窩更有賣相，節(jié)省人工挑毛成本，采用硫磺熏蒸方法來(lái)漂白燕窩，導(dǎo)致燕窩中二氧化硫有殘留。當(dāng)然，更有相關(guān)專業(yè)人士廈門(mén)出入境檢疫中心-徐敦明博士表示，天然燕窩也可能含有微量的二氧化硫，大部分燕窩企業(yè)自檢也是以10mg/kg作為限量標(biāo)準(zhǔn)。如果在燕窩加工過(guò)程中沒(méi)有掌握好二氧化硫類物質(zhì)的使用量，或有些企業(yè)為了追求其產(chǎn)品具有良好的外觀色澤或延長(zhǎng)食品包藏期限或?yàn)檠谏w劣質(zhì)食品，不顧標(biāo)準(zhǔn)限制，超量使用二氧化硫類添加劑，就有可能造成食品中二氧化硫的殘留量超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，從而對(duì)人體健康造成一定的不良影響。使用UV-1500PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)樣品中的亞硝酸鹽及二氧化硫效果靈敏，正確度及精密度高。

檢測(cè)依據(jù)：
GB／T5009．33—2016食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量的測(cè)定--分光光度法
GB／T5009．34-2003食品中亞硝酸鹽的測(cè)定--分光光度法
食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量的測(cè)定——分光光度法

原理： 
試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘二胺偶合形成紫紅色染料，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量，測(cè)得亞硝酸鹽的含量。硝酸鹽通過(guò)鎘柱還原成亞硝酸鹽，測(cè)得亞硝酸鹽的總量，由總量減去試劑亞硝酸鹽的含量即得硝酸鹽的含量。本法亞硝酸鹽和硝酸鹽的檢出限分別為1mg／kg和1.4mg／kg。

試劑及儀器：
UV-1500PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)
（1）亞鐵氰化鉀溶液(106g/L):稱取106.0g亞鐵氰化鉀，用水溶解,并稀釋至1 000mL。
（2）乙酸鋅溶液(220g/L):稱取220.0g乙酸鋅,先加30mL冰乙酸溶解，用水稀釋至1000mL。
（3）氨緩沖溶液(pH 9.6~9.7):量取30mL鹽酸,加100mL水,混勻后加65mL氨水,再加水稀釋至1000mL,混勻。調(diào)節(jié)pH至9.6~9.7。
（4）對(duì)氨基苯磺酸溶液(4 g/L):稱取0.4g對(duì)氨基苯磺酸,溶于100mL 20%鹽酸中,混勻,置棕色瓶中，避光保存。
（5）鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L):稱取0.2g鹽酸萘乙二胺,溶于100mL水中，混勻置棕色瓶中。

樣品預(yù)處理：
稱取5g(精確至0.001g)勻漿試樣(如制備過(guò)程中加水，應(yīng)按加水量折算),置于250 mL具塞錐形瓶中,加12.5mL50g/L飽和硼砂溶液,加入70C左右的水約150mL,混勻，于沸水，浴中加熱15min,取出置冷水浴中冷卻,并放置至室溫。定量轉(zhuǎn)移上述提取液至200mL容量瓶中，加入5mL 106g/L亞鐵氰化鉀溶液,搖勻,再加入5mL 220g/L乙酸鋅溶液,以沉淀蛋白質(zhì)。加水至刻度,搖勻,放置30min,除去上層脂肪,上清液用濾紙過(guò)濾,棄去初濾液30mL,濾液備用。

亞硝酸鹽的測(cè)定：
吸取40.0mL.上述濾液于50mL帶塞比色管中,另吸取0.00mL、0.20mL、0.40 mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0.0μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg亞硝酸鈉),分別置于50mL帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入2 mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,混勻，靜置3min~5min后各加入1mL2g/L鹽酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混勻,靜置15min,用1cm比色杯,以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)538nm處測(cè)吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。同時(shí)做試劑空白。

鹽酸副玫瑰苯胺光度法測(cè)定二氧化硫
原理： 
二氧化硫(或來(lái)自亞硫酸鹽)被四氯汞鈉吸收后，生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再與甲醛和鹽酸副玫瑰苯胺作用，并經(jīng)分子重排后，生成紫紅色的絡(luò)合物。顏色的深淺與二氧化硫的濃度成正比，可以用UV-1500PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行比色測(cè)定。本方法使用于二氧化硫游離型和結(jié)合型硫酸鹽殘留量的測(cè)定。

試劑及儀器：
(1)5mol/L氫氧化鈉溶液；0.5mol/L硫酸溶液；12g/L氨基磺酸銨溶液。
(2)四氯汞鈉吸收液：稱取13.6g氯化高汞及6g氯化鈉，溶于水中并稀釋至1000mL，放置過(guò)夜，過(guò)濾后備用。
(3)甲醛溶液：吸取0.55mL無(wú)聚合沉淀的36％甲醛，加水99.45mL稀釋，混勻。
(4)淀粉指示液：稱取1g可溶性淀粉，用少量水調(diào)成糊狀，緩緩傾入100m1沸水中，隨加隨攪拌，煮沸，放冷備用，此溶液臨用時(shí)現(xiàn)配。
(5)亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀[K Fe(CN) ，·3H 0]，加水溶解并稀釋至100m1。
(6)乙酸鋅溶液：稱取22g[Zn(CH COO) ·2H20]，溶于少量水中，加入3mL冰乙酸，加水稀釋至100mL。
(7)鹽酸副玫瑰苯胺溶液：稱取0.1gCHN Cl·4H20于研缽中，加少量水研磨使溶解并稀釋至100mL。取出20mL，置于100mL容量瓶中，加鹽酸溶液6mol／L，充分搖勻后使溶液由紅變黃，如不變黃再滴加少量鹽酸至出現(xiàn)黃色，再加水稀釋至刻度，混勻備用(如無(wú)鹽酸副玫瑰苯胺可用鹽酸晶紅代替)。
(8)0.1mol／L碘溶液。
(9)0.1mol／L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶。
(10) 二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取0.5g亞硫酸鈉，溶于200mL四氯汞鈉吸收液中，放置過(guò)夜，上清液用定量濾紙過(guò)濾備用。
(11) 二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：臨用前將二氧化硫儲(chǔ)備溶液以四氯汞鈉吸收液稀釋成每毫升含2ug二氧化硫。

樣品預(yù)處理：
稱取5—10g研磨均勻的樣品，以少量水濕潤(rùn)并移人100mL容量瓶中，然后加入20mL四氯汞鈉吸收液，浸泡4h以上，若上層溶液不澄清，可加入亞鐵氰化鉀及乙酸鋅溶液各2.5mL，最后用水稀釋至刻度，過(guò)濾后備用。

樣品測(cè)定：
吸取0.5—5mL上述樣品處理液于25mL具塞比色管中。另取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.5、2mL二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0、0.4、0.6、0.8、1.2、1.6、2、3、4ug二氧化硫)，分別置于25mL具塞比色管中。于樣品及標(biāo)準(zhǔn)管中各加四氯汞鈉吸收液至10mL，然后加入1mL12g／L氨基磺酸銨溶液、1m1甲醛溶液及1m1鹽酸副玫瑰苯胺溶液，搖勻，放置20min。用1cm比色皿以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，調(diào)節(jié)分光光度計(jì)于波長(zhǎng)550nrn處測(cè)吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。