應(yīng)用方案 ┃ 飼料中總汞、總磷的測定 原子熒光光度法 分光光度法

第一部分：飼料中汞的測定
原理
動物源性食品是食品行業(yè)的中的重要組成，在其生產(chǎn)過程中，過量的有毒有害物質(zhì)，特別是重金屬元素通過所飼養(yǎng)的動物排泄到土壤或水域中，對人類的生存環(huán)境構(gòu)成威脅。為維護(hù)我國動物源性食品安全，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下達(dá)第194號文件，決定加強(qiáng)飼料商品管理。其中重金屬元素汞毒性強(qiáng)，是飼料樣品中重要的檢測指標(biāo)。
試樣經(jīng)酸加熱消解后。在酸性介質(zhì)中,試樣中汞被硼氫化鉀(KBH.)或硼氫化鈉(NaBH,)還原成原子態(tài)汞,由載氣(氬氣帶人原子化器中，在特制汞空心陰極燈照射下，基態(tài)汞原子被激發(fā)至高能態(tài),在去活化回到基態(tài)時(shí),發(fā)射出特征波長的黃光,其熒光強(qiáng)度與汞含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T 13081- -2022
儀器及試劑
AFS-680原子熒光光度計(jì)。
汞空心陰極燈；
微波消解爐；
實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。
硝酸( 優(yōu)級純)。
30%過氧化氫。
硫酸(優(yōu)級純)。
混合酸液硫酸 +硝酸+水(1+1+8):量取10 mL硝酸(4:2.1)和10 mL硫酸(4.2.3),緩緩.
倒人80mL水中,冷卻后小心混勻。
硝酸溶液:量取50 mL硝酸,緩緩倒入450 mL水中,混勻。
氫氧化鉀溶液(5 g/L):稱取5.0g氫氧化鉀,溶于水中,稀釋至1 000 mL,混勻。
硼氫化鉀溶液(5 g/L):稱取5.0 g硼氫化鉀,溶于5.0 g/L的氫氧化鉀溶液中,并稀釋至
1000mL,混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
汞標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液:按GB/T602--2002中規(guī)定進(jìn)行配制,或者選用國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一汞標(biāo)準(zhǔn)溶
液(GBW 08617),此溶液每毫升相當(dāng)于1000ug汞。
汞標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:吸取汞標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL于100 mL容量瓶中,用硝酸溶液(4.2.5)稀釋至刻度,混勻,此溶液濃度為10 ug/mL.再分別吸取10 ug/mL汞標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL和5 mL于兩個(gè)100 mL容量瓶中，用硝酸溶液(4.2.5)稀釋于刻度,混勻,溶液濃度分別為100 ng/mL和500 ng/mL,分別用于測定低濃度試樣和高濃度試樣,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,現(xiàn)用現(xiàn)配。

分析步驟
微波消解法
稱取0.20g~1.0g試樣,精確到0.0001 g,置于消解罐中加人2 mL~10 mL硝酸，2mL~4mL過氧化氫,蓋好安全閥后,將消解罐放人微波爐消解系統(tǒng)中，根據(jù)不同種類的試樣設(shè)置微波爐消解系統(tǒng)的最佳分析條件(見表1和表2),至消解完全,冷卻后用硝酸溶液洗滌消解罐并定容至50 mL容量瓶中(低含量試樣可定容至25 mL容量瓶)混勻待測。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。


標(biāo)準(zhǔn)系列配制
低濃度標(biāo)準(zhǔn)系列:分別吸取100 ng/mL汞標(biāo)準(zhǔn)使用液0. 50 mL、1. 00 mL、2. 00 mL、4. 00 mL、5. 00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀釋至刻度,混勻。各自相當(dāng)于汞濃度1.0 ng/mL.2.0 ng/mL.4. 0 ng/mL.8. 0 ng/mL.10. 0 ng/mL.此標(biāo)準(zhǔn)系列適用于-般試樣測定。
高濃度標(biāo)準(zhǔn)系列:分別吸取500 ng/mL汞標(biāo)準(zhǔn)使用液0. 50 mL、1. 00 mL.2. 00 mL、3. 00 mL.4.00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀釋至刻度,混勻。各自相當(dāng)于汞濃度5. 0 ng/ mL、10.0 ng/mL.20. 0 ng/mL.30. 0 ng/ mL.40.0 ng/mL.此標(biāo)準(zhǔn)系列適用于魚粉及含汞量偏高的試樣測定。

儀器參考條件
光電倍增管負(fù)高壓:260V;汞空心陰極燈電流:30mA;原子化器:溫度300C,高度8.0mm;氬氣
流速:載氣500mL/min,屏蔽氣1000mL/min;測量方式:標(biāo)準(zhǔn)曲線法;讀數(shù)方式:峰面積;讀數(shù)延遲時(shí)間:1.0 s;讀數(shù)時(shí)間:10.0 s;硼氫化鉀溶液加液時(shí)間:8.0 s;標(biāo)準(zhǔn)或樣液加液體積:2 mL。儀器穩(wěn)定后，測標(biāo)準(zhǔn)系列，至標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r>0.999后測試樣。
濃度測定方式:設(shè)定好儀 器最佳條件,逐步將爐溫升至所需溫度后,穩(wěn)定10 min~20 min后開始測量。連續(xù)用硝酸溶液進(jìn)樣,待讀數(shù)穩(wěn)定之后,轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)系列測量,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。轉(zhuǎn)入試樣測量,先用硝酸溶液進(jìn)樣,使讀數(shù)基本回零,再分別測定試樣空白和試樣消化液,每測不同的試樣前都應(yīng)清洗進(jìn)樣器。
儀器自動計(jì)算結(jié)果方式:設(shè)定好儀器最佳條件,在試樣參數(shù)畫面輸入以下參數(shù):試樣質(zhì)量(g),稀釋體積(mL),并選擇結(jié)果的濃度單位,逐步將爐溫升至所需溫度,穩(wěn)定后測量。連續(xù)用硝酸溶液
進(jìn)樣,待讀數(shù)穩(wěn)定之后,轉(zhuǎn)人標(biāo)準(zhǔn)系列測量,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在轉(zhuǎn)入試樣測定之前,再進(jìn)人空白
值測量狀態(tài),用試樣空白消化液進(jìn)樣,讓儀器取其均值作為扣底的空白值。隨后即可依法測定試樣。測定完畢后,選擇“打印報(bào)告”即可將測定結(jié)果自動打印。

計(jì)算

式中:
ω試樣中汞的含量，單位為毫克每千克(mg/kg); .
C-試樣消化液中汞的含量,單位為納克每毫升(ng/mL);
C0-試劑空白液中汞的含量,單位為納克每毫升(ng/mL);
V--試樣消化液總體積,單位為毫升(mL);
m-試樣質(zhì)量,單位為克(g)。
測定結(jié)果以平行測定的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)值；
 
精密度
在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測量結(jié)果與算術(shù)平均值的絕對差值與該算術(shù)平均值的比值及相對偏差r應(yīng)符合下表要求；

測定結(jié)果/(mg/kg)	相對偏差（r）%
≤0.020	≤100
0.020-0.100	≤50
≥0.100	≤20

  
第二部分：飼料中總磷的測定  分光光度法
1.范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用鉬黃分光光度法測定飼料中總磷量的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料原料(除磷酸鹽外)及飼料產(chǎn)品中磷的測定。

2、引用標(biāo)準(zhǔn)
下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。
GB/T6437-2002

3.原理
將試樣中的有機(jī)物破壞，使磷元素游離出來，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的 [(NH4)3P04NH4VO3 ·16MoO3〕絡(luò)合物，在波長400 nm下進(jìn)行比色測定。

4.試劑
實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合 GB/T 6682中三級水的規(guī)格，本標(biāo)準(zhǔn)中所用試劑，除特殊說明外，均為分析純。
4.1， 鹽酸溶液:1+1
4.2 硝酸。
4. 3 高氯酸。
4.4 釩鉬酸銨顯色劑:稱取偏釩酸銨 1. 25 g，加水 200 mL加熱溶解，冷卻后再加入 250 ml硝酸 (4.3)，另稱取鉬酸銨25 g，加水400 mL加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容至 1 000 ml，避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用。
4.5 磷標(biāo)準(zhǔn)液:將磷酸二氫鉀在 105攝氏度干燥 1h，在干操器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水，定量轉(zhuǎn)入1 000 ml容量瓶中，加硝酸 3 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即為50 ug/mL的磷標(biāo)準(zhǔn)液。

5、儀器和設(shè)備
5.1 實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。
5.2 分樣篩:孔徑0.42 mm(40目)。
5. 3 分析天平:感量0. 0001 g,
5.4 V-1500型分光光度計(jì):可在 400 nm下測定吸光度。
5. 5 比色皿:1 cm
5.6 高溫爐:可控溫度在(55。士20)'C.
5.7 瓷坩堝:50 ml,.
5.8 容量瓶:50.100,1000 ml
5.9 移液管:1.0,2. 0,5.0,10.0 ml.
5.10 三角瓶:250 ml。
5.11 凱氏燒瓶:125,250 ml。
5.12 可調(diào)溫電爐:1000W

6.試樣制備 
​取有代表性試樣2 kg，用四分法將試樣縮分至250 g，粉碎過0.42 mm孔篩，裝入樣品瓶中，密封保存?zhèn)溆谩?br />
7、測定步驟
7.1 試樣的分解
7.1.1 干法{不適用于含磷酸氫鈣[Ca(H2PO4)2]的飼料} 稱取試樣 2 g-5 g(精確至。.0002g)于柑渦中，在電爐上小心炭化，再放人高溫爐，在 550 C灼燒 3 h(或測粗灰分后繼續(xù)進(jìn)行)，取出冷卻，加人 10 mL鹽酸(4-1)和硝酸(4.2)數(shù)滴，小心煮沸約10 min, 冷卻后轉(zhuǎn)入 100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.1.2 濕法
稱取試樣 0.5 g-5 g(精確至0. 000 2 g)于凱氏燒瓶中，加人硝酸(4.2)30 mL，小心加熱煮沸至黃 煙逸盡，稍冷，加人高氯酸(4.3)10 m工，繼續(xù)加熱至高氯酸冒白煙(不得蒸干)，溶液基本無色，冷卻，加 水 30 ml，加熱煮沸，冷卻后，用水轉(zhuǎn)入 100 mL容量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.1.3 鹽酸溶解法(適用于微量元素預(yù)混料) 稱取試樣。.2g^1 g(精確0.0002g)于100 mL燒杯中，緩緩加入鹽酸(4. 1)10 mL，使其全部溶解，冷卻后轉(zhuǎn)入 100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.2 工作曲線的繪制 準(zhǔn)確移取磷標(biāo)準(zhǔn)液(4. 5)0.0,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 ml于 50 mL容量瓶中，各加釩鉬氨酸顯色劑(4. 4) 10 ml ，用水稀釋到刻度，搖勻，常溫下放置 10 min以上，以0.0 mL溶液為參比，用 1 cm比色 皿，在 400 nm波長下用分光光度計(jì)測各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線
7.3 試樣的測定 準(zhǔn)確移取試樣分解液 1. 0 mL-10. 0 mL(含磷量50ug-750 ug)于50 mL容量瓶中，加人釩鑰酸 錢顯色劑(4.4)10 mL，用水稀釋到刻度，搖勻，常溫下放置 10 min以上，用 1 cm 比色皿在 400 nm波長下測定試樣分解液的吸光度 ，在工作曲線上查得試樣分解液的磷含量。

8 測定結(jié)果的計(jì)算及表述
8.1  結(jié)果計(jì)算
測定結(jié)果按式(1)計(jì)算：

x一 以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示的磷含量%;
m1 一 由工作曲線查得試樣分解液磷含量ug;
V- 試樣分解液的總體積ML;
m一 試樣的質(zhì)量g;
V1 一試樣測定時(shí)移取試樣分解液體積mL
8.2 結(jié)果表示
每個(gè)試樣稱取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為測定結(jié)果，所得到的結(jié)果應(yīng)表示至小數(shù)點(diǎn)后兩位。

9 允許差
含磷量 0.5%以下.允許相對偏差 10%;含磷量 0.5%以上，允許相對偏差 3%.