實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中的“5M1E”

“5M1E”代表什么？在細(xì)胞培養(yǎng)中有多重要？

• 人（Man）

• 機(jī)器（Machine）

• 材料（Material）

• 方法（Method）

• 測量（Measurement）

• 環(huán)境（Environment）

 

>   人（Man）

• 人是處于中心位置和主導(dǎo)地位，其它“機(jī)”、“料”、“法”、“環(huán)”、“測”要素離開“人”也無法運(yùn)轉(zhuǎn)。

• 研究、生產(chǎn)、質(zhì)量管理，以人為本，只有不斷提高人的質(zhì)量，才能有序推進(jìn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果、產(chǎn)品質(zhì)量、組織質(zhì)量、體系質(zhì)量及其組合的實(shí)體質(zhì)量的提高。

• 只有具備良好素質(zhì)、專業(yè)技能過硬的研究人員去開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，按照規(guī)定的程序完成研究、生產(chǎn)等過程，并在研究過程中減少對環(huán)境產(chǎn)生影響，整個(gè)實(shí)驗(yàn)室或細(xì)胞房才會(huì)有良性的發(fā)展。

• 建立良好、高效的人員管理規(guī)章制度，人崗匹配，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、試劑耗材管理人、儀器設(shè)備監(jiān)督人、值日生等。積極做好“傳、幫、帶”。

• 定期開展工作匯報(bào)，制定實(shí)驗(yàn)室緊急事件處理方案等。

人	腳	100-1000 個(gè)微生物/cm2
	頭皮	106個(gè)微生物/cm2
	額頭	105個(gè)微生物/cm2
	噴嚏	104 – 105個(gè)微生物
	唾液	107個(gè)微生物/mL
無菌服	6小時(shí)后	1 – 6個(gè)微生物/cm2
空氣	戶外	100 – 500個(gè)微生物/m3
	室內(nèi)	500 – 2000個(gè)微生物/m3

  細(xì)胞房內(nèi)，人是最大的“污染源”  

預(yù)防貼士：
進(jìn)入細(xì)胞房正確的穿衣順序：

• 換專用鞋（拖鞋，定期清潔）
• 無塵手套（避免不潔的雙手經(jīng)穿著時(shí)粘附于無塵衣上）
• 網(wǎng)帽/口罩（戴網(wǎng)帽時(shí)須確保頭發(fā)不可暴露于網(wǎng)帽外，之后戴口罩遮住口鼻）
• 無塵服（不要穿棉質(zhì)衣服，容易脫落纖維）
• 鞋套

   

>   機(jī)器（Machine）

機(jī)器指實(shí)驗(yàn)室中所存有的與各類實(shí)驗(yàn)相關(guān)的儀器設(shè)備，可分類別管理，設(shè)置儀器管理負(fù)責(zé)人，做好使用、點(diǎn)檢、保養(yǎng)等工作。

使用

• 每個(gè)儀器設(shè)備建立規(guī)范的操作程序，并做好使用記錄；
• 細(xì)胞房內(nèi)區(qū)域設(shè)置合理，定期清潔，比如生物安全柜、培養(yǎng)箱、顯微鏡、冰箱等要經(jīng)常清潔。

點(diǎn)檢

• 按照規(guī)定程序?qū)�儀器進(jìn)行狀態(tài)及性能的確認(rèn)，及早發(fā)現(xiàn)異常；
• 儀器出現(xiàn)異常要及時(shí)上報(bào)，并做好警示提醒，防止進(jìn)一步的破壞。

保養(yǎng)

• 精密儀器、使用頻率高的儀器需要按照既定時(shí)間與程序進(jìn)行檢修、保養(yǎng)；
• 一旦細(xì)胞房發(fā)生微生物污染，使用消毒液清潔儀器表面，水盤、水浴鍋添加殺菌試劑。

 

>   材料（Material）

材料指實(shí)驗(yàn)室中所有實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑、耗材、組織細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等。按照產(chǎn)品說明進(jìn)行分類正確儲(chǔ)存，并設(shè)置采購、倉庫管理人，購買正品，準(zhǔn)確做好管理工作。

培養(yǎng)試劑

• 按照產(chǎn)品說明正確保存、使用；

• 開封后的試劑及時(shí)使用，部分產(chǎn)品避免反復(fù)凍融與質(zhì)量下降；

• 污染的培養(yǎng)試劑經(jīng)消毒后再處理，不要直接倒入水池。

耗材

• 購買細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別，正確儲(chǔ)存、使用；

• 重復(fù)使用的耗材要注意清潔、滅菌完全以及效果測試；

• 污染的耗材要及時(shí)清理出細(xì)胞房。

 

>   方法（Method）

方法指實(shí)驗(yàn)室中涉及到細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)所遵循的標(biāo)準(zhǔn)程序或方法。不管是新人或老練的人員，均需要按照程序/方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)SOP。

1. 掌握細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)，熟悉實(shí)驗(yàn)室基本流程

2. 觀摩、練習(xí)細(xì)胞培養(yǎng)操作，復(fù)蘇、傳代、觀察、凍存 ，準(zhǔn)確做好實(shí)驗(yàn)記錄

3. 自主設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案熟悉更多細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)

4. 準(zhǔn)確操作各類細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)，制定合乎實(shí)驗(yàn)室相關(guān)SOP

 

>   測量（Measurement）

測量指實(shí)驗(yàn)過程中保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量所涉及的試劑配制、溶液計(jì)量、儀器精密性與性能的測量。配置專門測量人員，保準(zhǔn)公共試劑、公共儀器使用的準(zhǔn)確度與精確性。

• 按照正確流程配制試劑，調(diào)節(jié)pH、滲透壓，過濾，高壓滅菌等；

• 公共試劑正確配制、保存、分裝使用；精密、使用頻率高儀器做好準(zhǔn)確校準(zhǔn)與計(jì)量，保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，做好記錄與數(shù)據(jù)分析；

• 定期對計(jì)量、校準(zhǔn)的儀器進(jìn)行保養(yǎng)、檢修，保證其它測量工作的有序開展。

 

>   環(huán)境（Environment）

環(huán)境指實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)的整體環(huán)境與實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境以及不同實(shí)驗(yàn)操作之間銜接的環(huán)節(jié)。環(huán)境是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量可控的前提，環(huán)節(jié)是每個(gè)步驟、程序銜接的重要控制點(diǎn)。

整體環(huán)境

• 不同潔凈級(jí)別的細(xì)胞房，環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)會(huì)不同，各個(gè)區(qū)域設(shè)置合理；

• 發(fā)生大規(guī)模污染，根據(jù)實(shí)際條件，進(jìn)行全面消毒、清潔；

• 定期做好清潔工作，定期更換消毒液。

操作環(huán)境

• 生物安全柜/超凈臺(tái)等操作環(huán)境均要符合細(xì)胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境；

• 發(fā)生污染時(shí)，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、培養(yǎng)箱、離心機(jī)顯微鏡臺(tái)面等操作環(huán)境要準(zhǔn)確消毒、清潔。

保存環(huán)境

• 確保試劑、耗材等材料的保存條件正確；

• 污染試劑發(fā)生泄漏時(shí)，及時(shí)清潔保存環(huán)境，避免交叉污染；

• 定期清理過期產(chǎn)品、長期不用產(chǎn)品等。

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