MRL/Lpr小鼠模型的特點和常見問題解答

實驗室真心話大冒險
J博士學(xué)術(shù)了得，玩游戲卻“拉胯”
無奈只能被實驗室眾人輪流提問
正巧大家最近正在進行
系統(tǒng)性紅斑狼瘡課題研究
于是五花八門的提問紛紛“找上門來”
本以為J博士會“鴨梨山大”
哪知J博士微微一笑
這些知識點，早就有人講過了
上次的直播你一定缺課了�。。�

小提示：
如果你也正在進行系統(tǒng)性紅斑狼瘡研究
千萬不要錯過本篇知識點滿滿的集錦哦～
 

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種可能危及生命的慢性自身免疫病，但遺憾的是，該病至今仍然無法完全治愈。在長期與SLE的對抗中，科學(xué)家們通過對SLE小鼠模型的研究，逐步揭示遺傳易感性與環(huán)境因素在SLE發(fā)病中的作用。同時，在小鼠模型身上測試新型藥物和治療方法、開展臨床前體內(nèi)研究，也為臨床治療提供了指導(dǎo)意義。

用于SLE研究的小鼠模型眾多，不同的模型往往有一些特定的表征，對不同治療策略的響應(yīng)也不盡相同。在上一期關(guān)于SLE的直播回顧中，孫佳偉博士幫助大家總結(jié)了目前最常用的SLE小鼠模型的特點和應(yīng)用，也列出了一些選擇要點，幫助大家更好地理解模型、做出選擇。

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1：
淋巴細胞增生：根據(jù)外周血中白細胞計數(shù)，雌性約在16-18周齡發(fā)生淋巴增生，雄性約為18-20周齡。

2：
進行性腎損傷：尿白蛋白：肌酐酸比值隨周齡逐漸增升高。相比于對照小鼠，雌性MRL/Lpr小鼠約在11周齡時顯著升高；雄性約在19周齡時升高。

3：
淋巴結(jié)�。杭s有38%和5%的雌性在11周齡時出現(xiàn)頸部或腋下淋巴結(jié)腫大，約有18%的雄性在12周齡時出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)腫大。

4：
皮炎：雌性在13周齡時有3%的比例出現(xiàn)肩胛間和耳朵的損傷，18周齡時發(fā)病率上升到53%和35%。雄性自15周齡時開始出現(xiàn)皮膚損傷，但發(fā)病率始終在10%以下。

重點問題03
MRL/Lpr小鼠的常見問題

1：
關(guān)于給藥時間，因為不同設(shè)施小鼠出現(xiàn)表型的時間可能會有所差異，而且小鼠表型是隨時間逐漸加重的，不同的藥物處理可能對小鼠起始表型的強弱要求不同，所以需要根據(jù)自己的研究需求來確定合適的給藥時間。一般需要先進行預(yù)實驗，通過檢測相應(yīng)的指標來評估小鼠的disease onset以及出現(xiàn)目標表型的周齡，以此來確定預(yù)防性/治療性給藥的時間。

2：
在檢測指標方面，通常需要根據(jù)自己的研究需要，選擇合適的檢測assay。常見的指標主要包括：尿蛋白含量（絕對含量、高UA小鼠占比），通常采用試紙檢測（Albustix），用于確定小鼠的disease onset及給藥后的緩解情況；給藥前后測定血清尿素氮含量、血清總IgG和自身抗體含量，最常檢測的是ANA和anti-dsDNA，通常是采血后使用ELISA方法檢測；日常記錄生存率、體重；實驗終點時進行尸檢，脾臟、淋巴結(jié)的大小/重量記錄，脾臟免疫細胞分型，腎臟/皮膚組織學(xué)檢測等；其他器官的損傷也可以根據(jù)需要進行檢測。

3：
關(guān)于對藥效研究結(jié)果的分析，很難僅根據(jù)某一個表型就得出結(jié)論。需要綜合藥物作用機制以及具體的實驗細節(jié)，結(jié)合多次重復(fù)實驗結(jié)果、多種給藥和采樣時間、多項檢測指標、有時甚至需要使用其他模型，來綜合得出結(jié)論。
 

重點問題04
MRL/Lpr小鼠注意事項

1：
MRL/Lpr小鼠繁育比較困難，由于發(fā)病早，導(dǎo)致繁育周期比較短，每只雌鼠的窩產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)仔窩鼠都比較少。對于需要在短期內(nèi)開展實驗的老師來說，直接購買用于實驗的小鼠，會更有利于研究的進行。

2：
MRL遺傳背景的小鼠的傷口愈合過程更快、更徹底， 因此不建議使用耳缺刻的方式進行標記區(qū)分。

3：
Fas^Lpr突變有多個不同遺傳背景的小鼠，其在發(fā)病時間、疾病嚴重程度等存在差異。例如，在MRL遺傳背景上，4-7月齡即可見腎臟的病理學(xué)改變；而在B6或C3H背景上，14-16月齡才可見腎臟的病理變化^[1]。相比各自的對照小鼠，B6背景Fas^Lpr突變小鼠淋巴結(jié)重量增加24倍，MRL背景小鼠增加75倍，而C3H背景小鼠增加116倍，差異最大^[2]。因此，在購買前，需要充分了解不同遺傳背景對表型的影響，做出合理選擇，并在后期繁育過程中，使用合適的繁育策略，以確保遺傳背景的穩(wěn)定。

4：
SLE發(fā)病和環(huán)境密切相關(guān)，MRL/Lpr小鼠模型也是一樣，該模型的發(fā)病很容易受環(huán)境因素的影響，因此不同實驗室觀察到表型差異也是很常見的，比如尿蛋白上升的周齡、程度、比例等，都有可能由于飼養(yǎng)環(huán)境的變化而發(fā)生改變。因此，受到嚴格控制的飼養(yǎng)環(huán)境是模型數(shù)據(jù)穩(wěn)定非常重要的前提。建議在開展正式實驗前，確保自己設(shè)施環(huán)境的穩(wěn)定，然后進行預(yù)實驗，建立起表型的基線數(shù)據(jù)，以確定合適的實驗處理時間。

可能對于有些研究來說，在自己的設(shè)施里進行預(yù)實驗測試、環(huán)境風(fēng)險因素的排查和新檢測assay的建立會花費非常多的時間和精力，尤其是剛開始建立的自免平臺，可能需要花費比較長的時間才能建立起穩(wěn)定的實驗系統(tǒng)。

針對這種情況

也可以考慮選擇JAX藥效部門幫您進行一站式研究——Lupus Efficacy Studies | The Jackson Laboratory (jax.org)（詳情請查看：https://www.jax.org/jax-mice-and-services/in-vivo-pharmacology/immunology-services/autoimmune-diseases/lupus-studies）

JAX有著豐富的SLE小鼠模型飼養(yǎng)和實驗經(jīng)驗，遺傳質(zhì)量穩(wěn)定的小鼠模型結(jié)合多種給藥方式、豐富的檢測Assay，將有助于獲得可靠地、重復(fù)性更好的實驗數(shù)據(jù)。

參考文獻：
[1] JB;, K. V. E. R. (n.d.). Interaction of mutant LPR gene with background strain influences renal disease. Clinical immunology and immunopathology. Retrieved March 15, 2023, from https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/4042431/

[2] Kelley, V. E., & Roths, J. B. (1985). Interaction of mutant LPR gene with background strain influences renal disease. Clinical Immunology and Immunopathology, 37(2), 220–229. https://doi.org/10.1016/0090-1229(85)90153-9