Fetuin A胎球蛋白A對人預(yù)脂肪細(xì)胞株分化的影響及作用機制

瀏覽次數(shù)：581　發(fā)布日期：2023-5-15　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

實驗材料:

1. 人預(yù)脂肪細(xì)胞株3T3-L1

2. 重組人源Fetuin A蛋白

3. 細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM及補充物

4. 實時熒光定量PCR相關(guān)試劑

5. Western blot相關(guān)試劑

6. 甘油三酯(TG)測定盒

7. 細(xì)胞因子檢測試劑盒

8. 特異性通路抑制劑

9. 其他常規(guī)細(xì)胞實驗試劑

實驗方法:

1. 3T3-L1細(xì)胞培養(yǎng)至70-80%融合,改用分化培養(yǎng)基,加入Fetuin A(50、200ng/ml)或同質(zhì)體;

2. 分化第1、3、5天,收集細(xì)胞檢測PPARγ和C/EBPα的mRNA及蛋白表達(dá)(PCR及Western blot);

3. 分化第7天,檢測細(xì)胞內(nèi)TG含量及分泌的TNFα、IL-1β和IL-6;

4. 采用特異性抑制劑阻斷MAPK/PI3K通路,觀察Fetuin A的作用;

5. 采用siRNA敲低CSF-1R,檢測Fetuin A的作用。

實驗結(jié)果:

1. Fetuin A上調(diào)PPARγ和C/EBPα的表達(dá),增加TG積累,促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞分化;

2. Fetuin A上調(diào)TNFα、IL-1β和IL-6的分泌;

3. MAPK/PI3K通路抑制劑可逆轉(zhuǎn)Fetuin A的上述作用;

4. 敲低CSF-1R也可減弱Fetuin A對3T3-L1細(xì)胞分化的促進(jìn)作用。實驗結(jié)論:

Fetuin A可通過激活MAPK/PI3K通路、上調(diào)PPARγ和C/EBPα的表達(dá)、調(diào)控細(xì)胞因子的分泌等機制促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞的分化。這些效應(yīng)可能涉及Fetuin A與CSF-1R的相互作用。本研究有助于揭示Fetuin A參與脂肪代謝調(diào)控的分子機理,為開發(fā)治療代謝性疾病的新策略提供理論依據(jù)。

產(chǎn)品：Y07501 重組人胎球蛋白A Recombinant human Fetuin A

內(nèi)毒素：小于5EU/mg.

純度：SDS-PAGE檢測，純度大于95.0%。

規(guī)格：50ug/1g（工業(yè)客戶 100g和kg包裝）

介紹：

胎球蛋白A Fetuin A是一種人類血漿糖蛋白，屬于蛋白酶抑制劑 Cystatin 家族。胎球蛋白A在胚胎細(xì)胞和成年肝細(xì)胞中高表達(dá)，在單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中低表達(dá)。該蛋白具有半胱氨酸蛋白酶抑制劑樣結(jié)構(gòu)域、磷酸鈣結(jié)合位點和 TGF（轉(zhuǎn)化生長因子）-β 細(xì)胞因子結(jié)合基序。重組人胎球蛋白A 是一種含有282個氨基酸的A鏈和27個氨基酸的B鏈的異二聚體蛋白。由于糖基化，重組胎球蛋白A 在非還原條件下通過 SDS-PAGE 遷移時的表觀分子量為 45-55kDa。

胎球蛋白A由真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白，是將蛋白基因接入穩(wěn)定表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化CHO細(xì)胞，經(jīng)克隆篩選，質(zhì)量驗證，挑選的穩(wěn)定表達(dá)株，由化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基（不含有任何動物源成分）發(fā)酵制備，工藝穩(wěn)定，保證了產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。

生化/生理作用：

AHSG (α-2-HS-糖蛋白，也稱為胎球蛋白-A)是主要的血清蛋白成分，可發(fā)揮多種鈣依賴性生理活性，并可介導(dǎo)某些腫瘤細(xì)胞的生長信號。它還可以作為天然抗特定 TGF-β（轉(zhuǎn)化生長因子 β）和 BMP(骨形態(tài)發(fā)生蛋白)信號蛋白的拮抗劑。血清中胎球蛋白 A 的高水平與輕度成骨不全有關(guān)。另外，在佩吉特氏病中觀察到它的水平下降。它被預(yù)測為下咽鱗狀細(xì)胞癌早期診斷的潛在生物標(biāo)志物。

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來源：上海惠誠生物科技
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