花青素(Anthocyan)檢測(cè)試劑盒(微板法)使用說(shuō)明書(shū)

花青素(anthocyan,cyanidin)又稱花色素(anthocyanidin)，屬黃烷衍生物，溶解于細(xì)胞液中，是植物體內(nèi)廣泛分布的花色素之一，是花色素苷(anthocyains, anthocyanin)  水解而得的有顏色的苷元，植物體內(nèi)存在花青素、葉綠素、類胡蘿卜素、類黃酮、酚類等物質(zhì)與花、果實(shí)和葉片的顏色有關(guān)，而且與果實(shí)等樣品衰老過(guò)程密切相關(guān)，對(duì)其加工性能、存儲(chǔ)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等都有重要影響。
 
植物花青素檢測(cè)試劑盒(微板法)檢測(cè)原理是花青素溶于有機(jī)溶劑，以有機(jī)溶劑粗提花青素，花青素在酸性溶液中呈紅色，顏色深淺與花青素含量呈正比，于 530nm 有最大吸收波，可利用酶標(biāo)儀測(cè)定其吸光度，進(jìn)而計(jì)算出花青素的含量，方法簡(jiǎn)單易行。因組織中花青素種類不同，所需標(biāo)準(zhǔn)品亦不同，該試劑盒不含標(biāo)準(zhǔn)品，因此只能檢測(cè)花青素的相對(duì)含量；如需檢測(cè)樣品中花青素的準(zhǔn)確含量，請(qǐng)自備對(duì)應(yīng)種類的花青素標(biāo)準(zhǔn)品，主要用于植物組織或果實(shí)中花青素的提取以及定量檢測(cè)花青素相對(duì)含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
 
產(chǎn)品組成：

編號(hào) 名稱	TP1101 100T	Storage
Anthocyan Assay Buffer	2×500ml	RT
使用說(shuō)明書(shū)	1 份

 
自備材料：
1、實(shí)驗(yàn)材料：桃子、李子、蘋(píng)果、杏等果實(shí)或其他植物組織
2、研缽或勻漿器
3、離心管、離心機(jī)
4、濾紙或紗布
5、96 孔板
6、酶標(biāo)儀
 
操作步驟(僅供參考)：
1、花青素提取：
方法一：

①4℃預(yù)冷研缽或勻漿器，以及 Anthocyan Assay Buffer。
②取植物組織，洗凈，擦干，稱取新鮮樣品   0.25g，剪碎，置于研缽或勻漿器中。
③加入 2~3ml Anthocyan Assay Buffer，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入 10ml 離心管，用 Anthocyan Assay Buffer 沖洗研缽或勻漿器并轉(zhuǎn)移至離心，補(bǔ)加 Anthocyan Assay Buffer 至 8ml。
④4℃避光靜置20min，期間搖動(dòng)2~3 次，然后過(guò)濾至離心管，也可用離心機(jī)8000r/min離心 3min，濾液(上清液)即為花青素粗提液。
方法二：
將樣品按上述比例加入提取液中，置于 32℃溫箱浸提 4~8h(期間可搖動(dòng)數(shù)次)或室溫下避光浸提 24h，離心取上清即為花青素粗提液。

2、加樣及測(cè)定：取 96 孔板，用 Anthocyan Assay Buffer 做空白對(duì)照，取花青素提取液
（200~300ul）用酶標(biāo)儀在 530nm 波長(zhǎng)處讀取吸光度值；如果花青素濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。
 
計(jì)算：
花青素單位定義：以 OD 值為 0.1 時(shí)的花青素濃度稱為一個(gè)單位(U)；計(jì)算方法如下：組織樣品的花青素含量(U/g)=(A_測(cè)定-A_空白)/(0.1xW)
式中：A_測(cè)定=花青素提取液在 530nm 的 OD 值 A_空白=空白對(duì)照在 530nm 的 OD 值 W=樣品鮮重(g)
亦可用自備的花青素標(biāo)準(zhǔn)品做梯度稀釋(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1mg/ml)，用  Anthocyan  Assay  Buffer 做空白對(duì)照，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而計(jì)算出樣品中花青素的含量。
組織樣品的花青素(mg/g)={C×V_T}/(W×V₁)
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測(cè)定管花青素含量(mg/ml) V_T=花青素粗提液總體積(ml)=8
V₁=加樣時(shí)所用花青素粗提液的體積(ml) W=樣品鮮重(g)
液體樣品的花青素(mg/ml)=C×N/V
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測(cè)定管花青素含量(mg/ml) V=加樣時(shí)所用花青素粗提液的體積(ml)
N=稀釋倍數(shù)
 
注意事項(xiàng)：
1、為了避免花青素見(jiàn)光發(fā)生變化，操作時(shí)應(yīng)盡量避光，研磨或勻漿應(yīng)盡量縮短時(shí)間。