貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的常見問題及解決方案

01貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞不貼壁
可能原因：胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；細(xì)胞老化；接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。
解決方法：縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；啟用新的保種細(xì)胞；調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。
 
02懸浮細(xì)胞成簇
可能原因：培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子；支原體污染；蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解；DNA污染。
解決方法：用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；分離培養(yǎng)物，檢測支原體；DNasel處理細(xì)胞。
 
03培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢
可能原因：由于更換不同培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必須成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；接種細(xì)胞起始濃度太低；細(xì)胞已老化；支原體污染。
解決方法：比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；增加接種細(xì)胞起始濃度；換用新的保種細(xì)胞；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
 
04培養(yǎng)細(xì)胞生長不好
可能原因：
細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；
細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；
細(xì)胞傳代時(shí)間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；
胰酶消化時(shí)間過長或過短：時(shí)間過長，細(xì)胞死亡；時(shí)間過短，細(xì)胞未完全分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速溶。
污染
支原體污染；
霉菌污染。
培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證；
選擇的培養(yǎng)基是否合適；
培養(yǎng)基配制是否合適；
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。
培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常；
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。
解決方法：根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因，做出針對性的解決方案
注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)，接種量等：
避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)，合法，可朔源的血清）；
要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗(yàn)證；
注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。

05培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷；培養(yǎng)液滲透壓不正確；培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。
解決方法：檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；取新的保存細(xì)胞種；檢測培養(yǎng)液滲透壓；換入新鮮培養(yǎng)液。

關(guān)于我們
無錫耐思生命科技股份有限公司（以下簡稱“耐思”）于 2009 年成立，并創(chuàng)立 NEST 品牌，秉持“做高端耗材，創(chuàng)國際知名品牌”的信念，專注于生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的研發(fā)與制造。耐思擁有 7500m2 十萬級潔凈車間，2500m2 萬級潔凈車間，成熟的生產(chǎn)工藝、先進(jìn)的機(jī)器設(shè)備、專業(yè)的研發(fā)中心、資深的管理團(tuán)隊(duì)，是國內(nèi)領(lǐng)先的醫(yī)療器械和生命科學(xué)領(lǐng)域耗材制造商。
2020 年，公司正式更名為無錫耐思生命科技股份有限公司。

美國分公司成立
隨著業(yè)務(wù)的發(fā)展，NEST 產(chǎn)品已遠(yuǎn)銷北美、歐洲、日本、韓國、印度等全球多個(gè)國家，為了與海外客戶建立深厚的合作關(guān)系，并更快地將產(chǎn)品送到海外客戶手中， 我們于2003年在美國新澤西州成了了NEST美國分公司。NEST美國是屬于無錫耐思生命科技股份有限公司的分支機(jī)構(gòu)，擁有一支具有豐富經(jīng)驗(yàn)和銷售技巧的專業(yè)團(tuán)隊(duì)，能與客戶進(jìn)行深入的溝通，更好更快地了解客戶需求，并給予專業(yè)的技術(shù)支持。2022年，NEST美國將在亞利桑那州鳳凰城開設(shè)一個(gè)新的48,000英尺的倉庫，隨著新倉庫的落成，將為客戶極大的降低了存儲與物流成本。

引進(jìn)先進(jìn)設(shè)備，確保品質(zhì)穩(wěn)定
耐思為確保質(zhì)量的穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)“原料采購 - 生產(chǎn) - 包裝 - 滅菌 - 交付”的無縫對接， 2012年投資1.5億新建了2.7萬平米廠房（無塵潔凈車間），且引進(jìn)國際先進(jìn)電子輻照設(shè)備RhodotronTT200（輻照滅菌流程經(jīng) ISO13485、ISO11137 質(zhì)量體系認(rèn)證），進(jìn)口符合USP CLASS 6的醫(yī)用級原材料，按GMP質(zhì)量管理規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，現(xiàn)已取得ISO 9001、ISO 13485、ISO 11137、FDA、CE 認(rèn)證及醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證。
2021年NEST新增4500m2十萬級潔凈車間和1500m2萬級潔凈車間，用于醫(yī)療器械與醫(yī)藥包裝耗材的生產(chǎn)。
 
三大類產(chǎn)品——實(shí)驗(yàn)室耗材、醫(yī)療器械、醫(yī)藥包裝耗材
耐思的產(chǎn)品分為三大類：實(shí)驗(yàn)室耗材（細(xì)胞學(xué)類耗材、微生物檢測類耗材、分子生物學(xué)類耗材、通用耗材類）、醫(yī)療器械和醫(yī)藥包裝耗材。產(chǎn)品適用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、輕化工、食品、環(huán)保、生物能源、海洋生物資源、再生醫(yī)學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域，品項(xiàng)多、規(guī)格全，滿足了客戶不同的需求。相比進(jìn)口耗材，NEST 貨期短、品質(zhì)優(yōu)、價(jià)格低，可大大提高工作效率并降低使用成本。