紫外分光光度法測(cè)中草藥中鐵的含量的應(yīng)用方案

摘 要: 對(duì)白芍、黨參、白術(shù)、茵陳、天冬、枸杞子、當(dāng)歸、菟絲子、金銀花、桔梗中微量元素鐵的含量進(jìn)行了測(cè)定，為進(jìn)一步研究其藥理作用提供基礎(chǔ)。中草藥消化后配制成溶液，用鄰二氮菲作顯色劑，使用紫外分光光度計(jì)在510nm處測(cè)定各樣品的吸光度（A），求出樣品中微量元素鐵的含量。結(jié)果顯示，當(dāng)歸和金銀花中鐵的含量較豐富，分別為（135.3678±0.1111）μg/g和（125.9364±0.1599）μg/g;桔梗含鐵量最少，為（3.5109±0.1599）μg/g，10種中草藥中鐵含量有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)果為使用中草藥治療系統(tǒng)疾病提供了可靠數(shù)據(jù)，10種中草藥在用量范圍內(nèi)Fe含量適合人體每天正常攝入量。

      中草藥是我國(guó)寶貴的醫(yī)學(xué)財(cái)富，研究中草藥中的微量元素及其含量，對(duì)于認(rèn)清其藥學(xué)機(jī)理，進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用領(lǐng)域都有重要的現(xiàn)實(shí)意義。許多研究表明，微量元素可以直接參與或與其它成分協(xié)同作用而影響藥效。鐵是人體必需的微量元素之一，其在藥物代謝方面起著重要的作用 。鐵不僅參與血紅蛋白的合成，又是肌紅蛋白、細(xì)胞色素、過(guò)氧化氫酶、過(guò)氧化物酶等的組成部分。如果缺鐵會(huì)造成上述酶或蛋白質(zhì)合成不足，繼而影響氧和二氧化碳的運(yùn)輸以及氧的利用。因此，鐵和生命呼吸與細(xì)胞的生物氧化過(guò)程密切相關(guān)，具有重要的生理意義。為了探討中草藥中鐵與呼吸系統(tǒng)疾病之間的關(guān)系，本文選取10種治療呼吸系統(tǒng)疾病的中草藥采用了分光光度法測(cè)定其中鐵的含量。

1實(shí)驗(yàn)部分
1.1儀器
紫外分光光度計(jì)。
1.2試劑
濃HCl，濃HNO3 ；HClO4；NH 4 Fe（SO4）2・12H2O，鹽酸羥胺，鄰二氮菲，NaAc，均為優(yōu)級(jí)純。

1.3溶液的配制
鐵標(biāo)溶液:10mg/mL:準(zhǔn)確稱取0.8634g十二水硫酸鐵銨，置于燒杯中，用30mL2mol/L HCl溶液溶解后轉(zhuǎn)入1L容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，然后從中吸取50mL該溶液于500mL容量瓶中，加20mL2mol/LHCl溶液，用去離子水稀釋至刻度，搖勻。10%鹽酸羥胺水溶液（臨用時(shí)配制）。
0.15%鄰二氮菲水溶液（臨用時(shí)配制，應(yīng)用少許鹽酸溶解，再用去離子水稀釋）。1mol/L NaAc水溶液。

1.4樣品及樣品處理
1.4.1樣品 
白芍、黨參、白術(shù)、茵陳、天冬、枸杞子、當(dāng)歸、菟絲子、金銀花、桔梗，均為市售。
1.4.2樣品處理
取烘干后藥品搗碎，每一樣品稱取三份，每份1.0000g于50mL錐形瓶中，加10mL濃HNO3，封口放置過(guò)夜。次日加入10mL濃HNO3，5mLHClO4，于電熱板上緩慢加熱，當(dāng)剩下2mL左右時(shí)再分別加入20mL濃HNO3。5mLHClO4，繼續(xù)消化至溶液呈無(wú)色透明近約剩1mL時(shí)，停止加熱，用去離子水洗滌杯壁多次，洗液和殘液合并，定容于50mL容量瓶中。

1.5鐵標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取10mg/mL鐵標(biāo)液，0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0mL依次加入到50mL容量瓶中，再分別加入1mL10%鹽酸羥胺溶液、5mL1mol/L NaAc溶液及2mL0.15%鄰二氮菲溶液。每加入一種試劑后都要搖勻，用去離子水稀釋至刻度，靜置10min后，以0.0鐵標(biāo)溶液為空白，在510nm波長(zhǎng)下測(cè)量上述各溶液吸光度，然后制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6 樣品含量測(cè)定
將處理后樣品分別取5mL于50mL容量瓶中，依次加入10%鹽酸羥胺1mL，1mol/L NaAc5mL溶液及0.15%鄰二氮菲2mL。每加入一種試劑后都要搖勻。按儀器工作條件測(cè)定各樣品吸光度。

2結(jié)果與討論
2.1結(jié)果
10種中草藥鐵的含量測(cè)量結(jié)果表明，不同中草藥中鐵的含量有顯著差異，當(dāng)歸和金銀花中鐵含量較高，桔梗鐵含量最低。產(chǎn)生這種差異的原因，作者認(rèn)為是各種中草藥生長(zhǎng)環(huán)境和形態(tài)結(jié)構(gòu)不同造成的。

2.2討論
實(shí)驗(yàn)選取的這10種中草藥都是治療呼吸系統(tǒng)疾病的常用藥物。當(dāng)歸其性甘、辛、苦、溫，歸肝、心、脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)血調(diào)經(jīng)、活血止痛、托毒生肌、止咳平喘等功效，當(dāng)歸臨床上用于治療多種疾病，如:血虛面色萎黃、唇甲蒼白、頭昏目眩、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)少經(jīng)閉、痛經(jīng)、月經(jīng)過(guò)多、崩漏下血及胃腸出血、跌打損傷、瘀血腫痛、頭痛、手術(shù)后瘀血疼痛、痹痛麻木、中風(fēng)半身不遂、瘡瘍癰疽及肌膚痛癢、咳喘、心悸怔忡、失眠健忘、脈結(jié)代、黃疸等。金銀花為忍冬科半常綠纏繞灌木忍冬或紅腺忍冬及其它同屬植物的花蕾，或初開(kāi)的花，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效，主要用于外感熱病和熱毒癰腫。
鐵是人體必需的微量金屬元素，也是人體內(nèi)含量最高的微量元素，正常成年男性體內(nèi)含鐵量為3～5g，女性稍低。其中65%～80%存在于血紅蛋白中，20%～30%以鐵蛋白或含鐵血黃素形式存在于肝、脾及骨髓中，用于合成血紅蛋白，4%構(gòu)成肌紅蛋白，極微量構(gòu)成含鐵酶（細(xì)胞色素系統(tǒng)、細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化物氫酶等），是血紅蛋白、肌紅蛋白、紅細(xì)胞色素及其它酶系的主要成分，幫助氧的運(yùn)輸，促進(jìn)脂肪氧化。另外，鐵還參與黃嘌呤氧化酶活性中心的構(gòu)成，催化自由基反應(yīng)，損傷脫氧核糖核酸（DNA）、蛋白質(zhì)等大分子。在人體內(nèi)各元素平衡及相互作用中占有重要地位。鐵在生物氧化和呼吸過(guò)程中起重要作用，并參與氧和二氧化碳的轉(zhuǎn)運(yùn)。
人和動(dòng)物口服或吸入過(guò)量鐵對(duì)人體都會(huì)引起毒性及異常變化，但在某些情況下鐵對(duì)人體有益。鐵在人體的正常值為:全血為0.5mg/mL，血清為0.065～0.175mg/mL。鐵在體內(nèi)與感染的關(guān)系，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為許多有關(guān)酶的成分、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、吞噬細(xì)胞移動(dòng)、抑制因子、中性粒細(xì)胞吞噬功能等均與鐵水平有關(guān)。缺鐵時(shí)，影響機(jī)體血紅蛋白的合成，形成缺鐵性貧血，進(jìn)而使脫氧核糖核酸（DNA）合成減少，抗體的產(chǎn)生受到抑制，淋巴細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)能力降低，易發(fā)生感染。通過(guò)對(duì)32例小兒支氣管肺炎的治療研究發(fā)現(xiàn)小兒支氣管肺炎的兒童體內(nèi)鐵含量明顯低于健康兒童（P<0.01），因此缺鐵時(shí)更易感染小兒支氣管肺炎。
鐵吸收、周轉(zhuǎn)、利用和代謝都受到生物體的嚴(yán)格控制，鐵缺乏固然對(duì)健康不利，但鐵過(guò)量對(duì)機(jī)體造成的危害往往更嚴(yán)重。因此，無(wú)論是在日常生活中，還是在臨床醫(yī)學(xué)上，都應(yīng)科學(xué)地把握鐵的攝入量。測(cè)定結(jié)果顯示，這10種中草藥在用量范圍內(nèi)均小于人體每天正常攝入值。因此，利用這10種中草藥治療小兒支氣管肺炎，不會(huì)因鐵過(guò)量而導(dǎo)致其它更嚴(yán)重的疾病。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)10種中草藥中鐵含量的測(cè)定，為臨床用藥提供了基礎(chǔ)。