無外泌體胎牛血清在外泌體研究中的應(yīng)用

外泌體（Exosomes）是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的直徑大約為30-150nm的微小膜泡，在體液中廣泛存在，外泌體攜帶和傳遞重要的信號分子，參與細胞活動的重要調(diào)控。
 

圖1 外泌體示意圖（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)，僅供學習參考用）

2013年美國科學家Rothman、Schekmam以及德國科學家Sudhof因發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)部外泌體合成運輸調(diào)控機制聯(lián)合獲得了諾貝爾生理學與醫(yī)學獎，他們的發(fā)現(xiàn)使外泌體的研究到達了全新的高度。截止2023年7月，全球共有118個國家科研工作者從事外泌體研究，相關(guān)文章發(fā)表趨勢逐年攀升。
 

圖2 外泌體研究現(xiàn)狀

外泌體作為干細胞分泌的囊泡，攜帶有來自干細胞的某些蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA及RNA等生物活性物質(zhì)，干細胞所分泌的外泌體具有抗炎、抗細胞凋亡、促進細胞再生等作用，作為無細胞治療的新寵，外泌體有免疫原性低，更穩(wěn)定，更好保存，易于質(zhì)控的優(yōu)勢。
 

外泌體提取方法：差速離心法、密度梯度離心、超濾離心、磁珠免疫法、PEG-base沉淀法、色譜法以及試劑盒抽提法，這些試劑盒不需要特殊設(shè)備，隨著產(chǎn)品技術(shù)的提升，提取效率和純化效果逐漸提高，因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。
 

外泌體的常用鑒定方法有三種：透射電鏡法、納米顆粒跟蹤分析法及分子標志物檢測（至少3個陽性標志物、1個陰性標志物）。
 

圖3 外泌體鑒定圖（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)，僅供學習參考用）

外泌體幾乎可以與任何疾病相關(guān)聯(lián)，成為疾病標志物、疾病機理、藥物開發(fā)等研究的創(chuàng)新熱點。目前clinicaltrials.gov中有關(guān)外泌體的臨床試驗研究共163項，主要涉及各種癌癥、皮膚損傷、抗衰老、多囊卵巢綜合征、干眼癥等相關(guān)研究。
 

在外泌體研究中，如果使用胎牛血清培養(yǎng)細胞、通過收集上清液來提取外泌體進行后續(xù)實驗，胎牛血清中的牛源外泌體會對實驗分析造成極大的干擾。無外泌體血清應(yīng)運而生。
 

切勿直接將血清從-20°C進入37°C解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀，置于2-8℃融化，然后再室溫下使之全融，解凍過程中應(yīng)輕輕的搖晃均勻。血清在解凍過程中可能會出現(xiàn)少量絮狀或片狀析出物（鏡檢形狀類似小黑點），主要是血清中脂蛋白的變形或是纖維蛋白析出，并不影響血清本身的質(zhì)量，可使用0.45um過濾器過濾即可。