Cre模式小鼠助力Cre-loxP重組系統(tǒng)實現(xiàn)時空特異性打靶

這其中少不了Cre鼠的助力

有小伙伴@沒有蛋糕和汽水這樣評價道：

“沒有Cre鼠，flox鼠敲得再完美也沒有意義。果然每一只flox鼠都在尋找它的Cre鼠。”

那么，屏幕前的你是否還缺一只合適好用的Cre鼠呢？

快來把flox鼠的這位好搭檔帶回家吧！

工具鼠模型推薦

Cre鼠常用于與flox鼠雜交進行條件性基因敲除，也有研究將其用于切割位于報告基因前的終止序列，以達到熒光標記特定細胞的目的。改造并優(yōu)化Cre，結(jié)合細胞/組織特異性的調(diào)控元件，可實現(xiàn)時空條件性靶基因敲除/表達。

賽業(yè)生物藥物篩選評價小鼠模型平臺可為研究人員提供Cre工具鼠、誘導型Cre工具鼠、熒光標記模型等多類型工具鼠模型，助力新藥研發(fā)。

模型驗證——以Cx3cr1-iCre小鼠為例

將Cx3cr1-iCre小鼠與Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，產(chǎn)生雙基因雜合子代小鼠，Cre酶介導的重組將導致tdTomato蛋白在子代Cre陽性細胞中表達。分別采集7周齡子代小鼠的腦、皮膚、肝、腎、腸、脾和肺組織等組織，通過免疫熒光染色觀察Cre重組酶的表達情況。其基因型為——實驗組（Cre+）：Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]；對照組（Cre-）：Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/CKI]。

1.Cre重組酶腦部的表達情況

腦部組織免疫熒光染色

Cre+（Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]）小鼠在腦部組織中存在大量的tdTomato蛋白紅色熒光，其表達與小膠質(zhì)細胞標記物IBA1的表達的存在共定位，表明在腦部小膠質(zhì)細胞中存在大量的Cre重組酶表達，而對照組（Cre-）小鼠中檢測不到tdTomato紅色熒光的表達，不存在Cre重組酶的表達。

2.Cre重組酶在皮膚組織中的表達情況

皮膚組織免疫熒光染色

Cre+（Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]）小鼠在皮膚組織中存在大量的tdTomato蛋白紅色熒光，表明在該部位存在大量的Cre重組酶表達，表達的細胞可能是巨噬細胞。而對照組（Cre-）中的紅色熒光是由于Rosa26-LSL-tdTomato品系小鼠自身的泄漏造成的（內(nèi)部數(shù)據(jù)顯示Rosa26-LSL-tdTomato小鼠有幾率在皮膚出現(xiàn)輕微泄漏，但在其它部位并不存在泄漏）。

3.Cre重組酶在肺、腎、肝和腸道的表達情況

肺、腎、肝和腸道免疫熒光染色

Cre+小鼠在肺部、腎臟、肝臟和腸道的部分組織中存在tdTomato蛋白紅色熒光，表明在這些部位存在Cre重組酶表達，表達的細胞可能為巨噬細胞。而對照組（Cre-）小鼠中檢測不到tdTomato紅色熒光的表達，不存在Cre重組酶的表達。

4.Cre重組酶在脾臟的表達情況
 

脾臟免疫熒光染色

Cre+小鼠在脾臟中存在少量的tdTomato蛋白紅色熒光，表明在脾臟中Cre重組酶表達較低。而對照組（Cre-）小鼠中檢測不到tdTomato紅色熒光的表達，不存在Cre重組酶的表達。

總結(jié)
Cx3cr1-iCre小鼠模型中Cre重組酶的表達主要定位于腦組織小膠質(zhì)細胞中，也可以在腸道、肺部、肝臟和皮膚的部分部位檢測到Cre重組酶介導的重組，這些發(fā)生重組的細胞可能是巨噬細胞，此外，在脾臟中也存在少量的重組信號。綜上所述，該模型可作為小膠質(zhì)細胞及其他組織巨噬細胞類型工具鼠使用。