非酒精性脂肪性肝模型、異種移植肝癌模型、自發(fā)肝癌小鼠模型的介紹

非酒精性脂肪性肝模型

非酒精性脂肪性肝�。∟onalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是常見的肝臟疾病之一，患者的脂肪在肝臟中過度累積，這種堆積不是由大量飲酒引起的；非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis, NASH）則是該疾病的亞型。NAFLD/NASH的臨床前動(dòng)物模型有飲食誘導(dǎo)、化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)等。賽業(yè)生物可提供多種非酒精性脂肪肝小鼠模型及表型分析服務(wù)，同時(shí)也可根據(jù)實(shí)際情況定制研究人員需要的動(dòng)物模型。

飲食誘導(dǎo)小鼠模型
給予動(dòng)物高脂、高糖飼料喂養(yǎng)建立的脂肪肝模型，其主要發(fā)病機(jī)制是營養(yǎng)過剩，食物中脂類、膽固醇或糖類過量，無法完全吸收利用，脂類堆積于肝而引發(fā)脂肪肝，進(jìn)一步出現(xiàn)肝炎性改變及纖維化。該模型與人類發(fā)病相似，是最常見的NAFLD動(dòng)物模型。賽業(yè)生物通過高脂高膽固醇高果糖飼料（GAN）喂養(yǎng)構(gòu)建的NASH小鼠模型，可作為闡明非酒精性脂肪肝的病理生理機(jī)制以及新藥的開發(fā)的動(dòng)物模型。
 

使用GAN高脂高膽固醇高果糖飲食誘導(dǎo)的NASH模型的體重及血生化檢測

結(jié)果顯示：建模30周時(shí)，NASH組小鼠的體重、6h空腹血糖值、血清中ALT、AST和TC濃度均顯著高于對照組。
 

使用GAN高脂高膽固醇高果糖飲食誘導(dǎo)的NASH模型的病理切片及NAS評分

結(jié)果顯示：造模26周后，與對照組相比，NASH組小鼠的肝組織出現(xiàn)了明顯的脂肪變性、氣球樣變與纖維化。此外，NASH組小鼠的NAS評分從造模后第16周開始，均達(dá)到了5分，與對照組差異顯著，NASH小鼠造模成功。

化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)模型
四氯化碳（CCl4）可造成肝損傷，可單獨(dú)施用或配合高脂飲食來誘發(fā)脂肪肝或肝纖維化。其機(jī)制主要是CCl4誘導(dǎo)肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致有害的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)過氧化產(chǎn)物不斷產(chǎn)生和積累，并發(fā)生嚴(yán)重的壞死反應(yīng)，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能破壞。

1.誘導(dǎo)肝纖維化和肝硬化
CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化和肝硬化在許多方面反映了與毒性損傷相關(guān)的人類疾病模式，α-SMA表達(dá)、星狀細(xì)胞活化和關(guān)鍵基質(zhì)成分（包括膠原蛋白-1、基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑TIMPs）等已在該模型的發(fā)病機(jī)制中得到證實(shí)。CCl4誘導(dǎo)在肝臟中引起可重現(xiàn)的和可預(yù)測的纖維化反應(yīng)，使其成為抗纖維化和抗肝硬化治療的臨床前藥理學(xué)研究和肝纖維化-肝硬化-肝癌變化的病理生理學(xué)研究的寶貴基礎(chǔ)。
 

WD和CCl4處理過的小鼠與人類NASH的組織學(xué)比較^[1]

2.誘導(dǎo)肝損傷
CCl4誘導(dǎo)肝損傷模型是一種廣泛應(yīng)用于肝臟病理研究的模型，其形態(tài)學(xué)和生化特征與人類肝臟疾病細(xì)胞病變相似。單劑量CCl4可導(dǎo)致中心部位壞死和脂肪變性，而長期給藥可導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌（HCC）。研究人員構(gòu)建了使用急慢性CCl4誘導(dǎo)的肝損傷模型并使用多種評估手段來評估新藥與新療法的療效。
 

對照組與實(shí)驗(yàn)組的肝臟標(biāo)本進(jìn)行天狼星紅染色^[2]
 

異種移植肝癌模型

異種移植肝癌模型是將不同種屬來源的腫瘤細(xì)胞株移植到動(dòng)物上所構(gòu)建的模型，可分為異種皮下移植、原位移植等。其中，人源的異種皮下移植即把人源腫瘤細(xì)胞或組織移植于模型動(dòng)物的腋窩、背部皮下等部位，這類方法有成瘤時(shí)間快、成模周期短、瘤體觀察方便的優(yōu)點(diǎn)，常用于篩選抗癌新藥，是研究腫瘤細(xì)胞增殖以及體內(nèi)篩選藥物最常用的模型之一。

制備此類肝癌模型，可用肝癌細(xì)胞（如HuH7、Hep G2、NCI-H1299）接種到小鼠腋窩、背部皮下等部位進(jìn)行建模，或者腫瘤組織先在免疫缺陷鼠皮下荷瘤，成功后再將腫瘤組織小塊移植到小鼠的皮下進(jìn)行建模。賽業(yè)生物可為您提供多種小鼠皮下移植肝癌模型以及相應(yīng)的藥效學(xué)服務(wù)。

小鼠肝癌細(xì)胞Hep G2皮下移植腫瘤及體重生長曲線
 

自發(fā)肝癌小鼠模型

自發(fā)性肝癌模型是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)人工處置，在人工創(chuàng)造的環(huán)境中所發(fā)生的腫瘤。這種模型最大的優(yōu)點(diǎn)就是排除了人為因素的干擾，較好還原了動(dòng)物模型在自然條件下的發(fā)病情況。賽業(yè)生物構(gòu)建的Alb-Cre+/MYC+小鼠模型（產(chǎn)品編號：C001339），即可用于肝癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制、藥物篩選及療效評價(jià)等相關(guān)研究。

Alb-Cre+/MYC+小鼠通過H11-CAG-LSL-hMYC-IRES-EGFP小鼠與Alb-Cre小鼠交配獲得。MYC基因是一種原癌基因，其編碼的核蛋白在細(xì)胞周期進(jìn)程、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用。Alb-Cre介導(dǎo)的重組導(dǎo)致H11-CAG-LSL-hMYC-IRES-EGFP小鼠的轉(zhuǎn)錄終止序列l(wèi)oxp-Stop-loxp缺失并在肝臟中過表達(dá)人源MYC原癌基因。該模型可自發(fā)肝癌，發(fā)病時(shí)間較早。
 

Alb-Cre+/MYC+小鼠生存曲線

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，50%的Alb-Cre+/MYC+小鼠在6周齡左右發(fā)生死亡。

Alb-Cre+/MYC+小鼠肝臟瘤體觀察

結(jié)果顯示，與正常小鼠相比，3周齡Alb-Cre+/MYC+小鼠肝臟腫瘤較小，10周齡腫瘤明顯增多且體積較大，發(fā)生明顯的病變。

參考文獻(xiàn)：
[1]Tsuchida, Takuma., Lee, Youngmin A., Fujiwara, Naoto., Ybanez, Maria.,  and Allen, Brittany.. "A simple diet- and chemical-induced murine NASH model with rapid progression of steatohepatitis, fibrosis and liver cancer." Journal of hepatology 69.2(2018):385-395.

[2]Scholten, D., Trebicka, J., Liedtke, C.,  and Weiskirchen, R.. "The carbon tetrachloride model in mice." Laboratory animals 49.1 Suppl(2015):4-11.