細(xì)胞鋪板不均勻的原因及解決方案
細(xì)胞鋪板不均勻？3招鋪遍天下板子無敵手！
為什么把細(xì)胞鋪均勻就那么的難?什么米字法、十字法、螺旋法、還有搖板子要拿起來搖、 或者一定要放在臺子上磨（那種板子與臺子摩擦出來尖銳的聲音...... 最后放進(jìn)孵箱之前,還生怕幾步路搖壞了才鋪好的板子........）五花八門.
不過大多數(shù)技巧其實(shí)并沒有太大的用處，本文總結(jié)最實(shí)用的細(xì)胞鋪板的3種手法技巧，有了這些手法，細(xì)胞鋪均勻不是事兒！
首先，細(xì)胞鋪板不均勻分為三種情況：
1.中間多，周圍少
2.中間少，四周多
3.一坨一坨成塊
到底該怎么拯救呢？
手法一：均勻單層
要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞，手法如下：
1.細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min。
2.在滴入細(xì)胞時，細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。
3.滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。
4.置于水平臺上，放置10-20分鐘
5.放入孵箱。
在細(xì)胞鋪板時，每一種板子的孔面積有多大，培養(yǎng)的液體量以及加入細(xì)胞量參考下圖.
手法二：中間少，周圍多
其實(shí)細(xì)胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻，比如，做免疫熒光時可以鋪中間少，周圍稍多的板子，同時檢測到單個細(xì)胞的形態(tài)，另外又可以照一點(diǎn)低倍的用作于統(tǒng)計(jì)，所有的細(xì)胞都在一個環(huán)境中。
特別說明一下：這里的多也只是相對于多，細(xì)胞也是單層的。
中間
四周
要鋪這樣的細(xì)胞樣子，那鋪細(xì)胞時要注意手法了：
1.細(xì)胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤洗，直接從邊上滴入混有細(xì)胞的培養(yǎng)基。
2.放置30s-1min后，前后搖晃5-8次。
3.放在水平臺上靜置2-5min。
4.放入孵箱。
手法三：中間多，周圍少
一般在提取蛋白或者提取RNA的時候有時會這樣鋪板，因?yàn)橛行┘?xì)胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的，想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：
1.細(xì)胞板子不需要提前潤洗，從中間滴入進(jìn)去后。
2.把板子朝一個方向順時針或者逆時針旋轉(zhuǎn)3-5圈。
3.水平臺上靜置2-5min。
4.放入孵箱。
想要細(xì)胞鋪板鋪得好，背景知識很重要。在鋪細(xì)胞的時候，需要準(zhǔn)確的知道所養(yǎng)細(xì)胞的特性，比如：
1.細(xì)胞的名稱，來源。
2.細(xì)胞的屬性。
3.細(xì)胞分裂時間。
最主要的是要搞清楚細(xì)胞的生長曲線，推斷鋪板后多久可以到達(dá)什么細(xì)胞密度。
細(xì)胞鋪板后，細(xì)胞狀態(tài)不好怎么辦？
建議從以下幾個方面考慮一下原因：
1.用來鋪板的細(xì)胞狀態(tài)本身就不好。
2.用來鋪板的細(xì)胞傳代次數(shù)太多，有些老化。
3.胰酶消化時間過長。
4.中和的血清量及時間不夠。
5.支原體污染。
細(xì)胞鋪板是一個經(jīng)驗(yàn)積累的過程，手法也需要積極的改進(jìn)，不要生搬硬套，也不要一味追求絕對的鋪均勻，在實(shí)驗(yàn)過程中多思考細(xì)胞本身的特征和屬性，出現(xiàn)問題積極解決。
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