肺癌PD-1免疫檢查實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果分析

實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介

PD-1，全稱為“程序性死亡受體1”，又稱為CD279，是一種重要的免疫抑制分子。PD-1主要功能是下調(diào)免疫系統(tǒng)對(duì)人體細(xì)胞的反應(yīng)、抑制T細(xì)胞炎癥活動(dòng)，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)并促進(jìn)自身耐受。PD-1發(fā)揮功能可以預(yù)防自身免疫性疾病，但也會(huì)阻止免疫系統(tǒng)攻擊癌細(xì)胞，造成腫瘤進(jìn)展。通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)PD-1表達(dá)，可以反映腫瘤進(jìn)展情況。多項(xiàng)研究顯示，PD-1在腫瘤患者的外周血CD8+T細(xì)胞表面過表達(dá)，并與患者的病理變化及臨床療效密切相關(guān)。CD8+PD-1+T 細(xì)胞在癌患者外周中的比例明顯增加,且晚期患者的CD8+PD-1+ T細(xì)胞水平高于早期癌患者,由此提示PD-1分子在癌患者外周血CD8+ T 細(xì)胞中的應(yīng)答水平發(fā)生改變,并與患者疾病的進(jìn)展密切相關(guān)。

實(shí)驗(yàn)材料與方法

檢測(cè)方法：

樣本制備：

1. 消化酶制備單細(xì)胞懸液，并過濾；

2. 裂解紅細(xì)胞，1 mL 1X RBC裂解紅細(xì)胞,室溫10 min(根據(jù)廠家推薦)；

3. 清洗：加入1 ml染色緩沖液，350g，離心5 min，棄上清；

4.可重復(fù)步驟4；

5. 染色：根據(jù)廠家推薦用量進(jìn)行染色，室溫避光孵育20 min；

6. 清洗：加入1 ml染色緩沖液，350g，離心5 min，棄上清；

7.加入200-300 ul染色緩沖液，重懸后上機(jī)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

 數(shù)據(jù)結(jié)果

圈門邏輯：

腫瘤組織中先圈出白細(xì)胞的信號(hào)CD45+（圖A），再圈總的CD3+T細(xì)胞（圖B），再分別看CD4（圖C）、CD8（圖D）、NK和NKT（圖E）在淋巴細(xì)胞中的占比，最重要的是看PD-1在淋巴的CD3+T細(xì)胞的雙陽(yáng)信號(hào)（圖F）。腫瘤組織中淋巴細(xì)胞的占比會(huì)下降，特別是發(fā)展到后期，白細(xì)胞整體降低，PD-1在CD3+T中信號(hào)明顯。PD-1在CD8+T細(xì)胞中表達(dá)水平較低。

結(jié)果分析總結(jié)：

腫瘤組織中，淋巴細(xì)胞亞群傾向百分比降低、分群不明顯，但是此次檢測(cè)T細(xì)胞分群基本明顯。
 

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