噬菌體展示ELISA鑒定的抗體選擇技術(shù)
無論用什么方法制備抗體，也不論制備何種抗體。制備的抗體的功能驗(yàn)證是十分重要的，而功能驗(yàn)證的前提是要得到高純度的蛋白。通常我們使用的驗(yàn)證功能的方法是間接法elisa檢測。間接elisa的原理這里不再贅述，但我們需要確定所用酶標(biāo)抗體，這通常是表達(dá)的蛋白上所帶有的標(biāo)簽蛋白的抗體。在此我們以噬菌體表面展示為例，說明抗體制備的ELISA鑒定抗體選擇。
首先對表面展示相關(guān)載體做一個介紹：
pADL-10 Low-Display Phagemid Vector Series:
The phagemid pADL-20 Vector Series:
pADL-100 Maximum Display Phagemid Vector Series:
fADL Multivalent Phage Vector Series:
pHAL30:
phen:
pCANTAB:
這里只展示了一些載體的圖譜，但通過這些載體的組成，我們可以了解到：用噬菌體展示技術(shù)制備抗體時，選擇的噬菌體或嗜菌粒表面展示載體通常都帶有標(biāo)簽蛋白——
His標(biāo)簽：該融合標(biāo)簽是由六個組氨酸殘基組成的，可于目的蛋白的C端或N端插入，是蛋白純化最常用的標(biāo)簽，可以利用鎳柱將與His標(biāo)簽融合表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行純化，增加蛋白的純度。
Hemagglutinin (HA)標(biāo)簽：該標(biāo)簽含有9個氨基酸，序列為YPYDVPDYA，其源于流感病毒紅細(xì)胞凝集素表面的抗原決定簇，對目的蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小, 易融合表達(dá)到目的蛋白的N端或C端。易于用Anti－HA抗體進(jìn)行ELISA等檢測。
Myc標(biāo)簽：該標(biāo)簽含有10個氨基酸，標(biāo)簽序列為EQKLlSEEDL，可融合表達(dá)至目的蛋白的N端或C端。這10個氨基酸表達(dá)在不同的蛋白質(zhì)框架中仍可作為抗原表位識別其相應(yīng)抗體，因此Myc tag已成功應(yīng)用在 Western-blot雜交技術(shù)、免疫沉淀和流式細(xì)胞計量術(shù)中, 用于檢測目的重組蛋白的表達(dá)。
甚至有時候會帶上兩個標(biāo)簽，His+HA，His+Myc，進(jìn)行兩種親和層析的純化，以得到高純度、高特異性甚至高溶解性的目的蛋白。
酶標(biāo)抗體可以直接用于ELISA檢測，減少了二抗的使用，可以節(jié)約時間和成本。如果利用間接ELISA方法使用酶標(biāo)二抗進(jìn)行檢測，在構(gòu)建載體的過程中也不需要加入標(biāo)簽，可以直接進(jìn)行噬菌體的ELISA檢測，也不必?fù)?dān)心標(biāo)簽的引入對抗體表達(dá)的影響。
