根據(jù)孔數(shù)、形狀、處理方式、顏色等綜合選擇合適細(xì)胞培養(yǎng)板的方法

細(xì)胞培養(yǎng)是一種基本的生命科學(xué)研究技術(shù)，已成為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究的重要手段。細(xì)胞培養(yǎng)板是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常用和重要的實(shí)驗(yàn)室耗材，選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)板對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性有至關(guān)重要的影響。
 

細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同可分為平底、圓底（U型）和V底（V型）；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；表面處理方式有TC處理和超低吸附處理；顏色有透明色、白色、黑色等。那么如何從這么多的規(guī)格中選擇適合實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板呢？跟小愛(ài)去瞅瞅怎么選擇吧。
 

一、孔數(shù)的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板的孔數(shù)包含6孔、12孔、24孔、48孔、96孔和384孔。不同孔數(shù)的培養(yǎng)板能培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量不同（見(jiàn)表1），最終的應(yīng)用場(chǎng)景也會(huì)不同。如何選擇孔數(shù)主要根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需的通量水平以及具體的實(shí)驗(yàn)要求來(lái)決定。例如WB、流式檢測(cè)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，需要較多的細(xì)胞樣本量，最終的檢測(cè)通量較低，一般會(huì)選擇6孔板、24孔板；又如CTG實(shí)驗(yàn)、CCK8實(shí)驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)通量較高，最終的檢測(cè)手段可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，多數(shù)可以選擇96孔板或者384孔板。
 

表1 不同類型細(xì)胞培養(yǎng)板通用信息

二、底部形狀的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同主要分為平底、圓底（U型）和V底（V型）三大種。平底可用于任何類型細(xì)胞培養(yǎng)，是我們?nèi)粘＜?xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中使用最多的。一般針對(duì)特殊實(shí)驗(yàn)需求會(huì)用到圓底（U型）和V底（V型）培養(yǎng)板，日常實(shí)驗(yàn)中用的較少。圓底（U型）多用于培養(yǎng)懸浮細(xì)胞，例如免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)需要兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)，需要二者相互接觸以刺激，圓底（U型）板可利用重力將細(xì)胞聚集在小范圍內(nèi)。V底（V型）板中細(xì)胞緊密接觸，一般用于細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)，可使有效靶細(xì)胞緊密接觸[也可用圓底（U型）板替代，加入細(xì)胞后，低速離心即可]。

三、表面處理方式的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板的處理方式主要有TC處理和超低吸附處理。選擇哪種表面處理方式，主要取決于培養(yǎng)的細(xì)胞是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)板一般采用的原材料是聚苯乙烯,這一材料具有疏水性。對(duì)于貼壁細(xì)胞而言,需要貼附在親水表面?zhèn)饶苌�長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)TC處理的細(xì)胞培養(yǎng)板,表面改性后更適合貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。超低吸附處理是將特殊的兩性分子聚合物鍍膜至培養(yǎng)板表層，可有效抑制細(xì)胞附著，從而滿足懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的需求。因此對(duì)于貼壁細(xì)胞可選擇TC處理細(xì)胞培養(yǎng)板，對(duì)于懸浮細(xì)胞可選擇超低吸附處理細(xì)胞培養(yǎng)板或者未經(jīng)任何處理的細(xì)胞培養(yǎng)板。

四、細(xì)胞培養(yǎng)板顏色的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板的顏色與應(yīng)用息息相關(guān)。細(xì)胞培養(yǎng)板的顏色主要有透明、白色、黑色。如果用相差顯微鏡或肉眼觀察細(xì)胞，可選擇透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。對(duì)于可見(jiàn)光光譜以外的應(yīng)用（如冷光或熒光），就必須使用有顏色的細(xì)胞培養(yǎng)板（如白色或黑色）的。在使用從頂部讀數(shù)的儀器時(shí)，底部應(yīng)該是不透明的，而使用顯微鏡或底部讀數(shù)的儀器時(shí)，應(yīng)選擇底部透明的培養(yǎng)板。冷光樣品通常選擇白色表面，以便最大限度提高信號(hào)的反射率，而大于300nm的熒光應(yīng)用時(shí)通常使用黑色表面，以吸收激發(fā)信號(hào)。同時(shí)有顏色的表面還可以防止相鄰孔之間的信號(hào)串?dāng)_。具體應(yīng)用所采用的不同顏色培養(yǎng)板總結(jié)如下：

1）發(fā)光檢測(cè)（冷光）—白色細(xì)胞培養(yǎng)板，以便最大限度提高信號(hào)的反射率；
2）熒光檢測(cè)（熒光）—黑色細(xì)胞培養(yǎng)板，以吸收激發(fā)信號(hào)，可以防止相鄰孔之間的信號(hào)串?dāng)_；
3）頂部讀數(shù)—底部不透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。

顯微鏡或底部讀數(shù)—底部透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。

五、細(xì)胞培養(yǎng)板與酶標(biāo)板的使用辨別

酶標(biāo)板作為固相載體對(duì)抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用，可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry)，酶活、酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，酶聯(lián)免疫測(cè)定(ELISAs)，細(xì)胞增殖與毒性分析，細(xì)胞凋亡檢測(cè)(MTT)，報(bào)告基因檢測(cè)及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等實(shí)驗(yàn)。相比于細(xì)胞培養(yǎng)板，酶標(biāo)板需要盡量降低實(shí)驗(yàn)誤差，制作要求高，價(jià)格也相對(duì)較高。96孔細(xì)胞培養(yǎng)板和酶標(biāo)板有一定的功能交叉，它們使用上有哪些區(qū)分呢？

1、細(xì)胞培養(yǎng)板可以當(dāng)酶標(biāo)板使用嗎？

當(dāng)測(cè)試可見(jiàn)光波長(zhǎng)的吸收值時(shí)，大多數(shù)96孔板透明板都可以用。但是當(dāng)測(cè)試高精度和特殊波長(zhǎng)，為避免孔板產(chǎn)生的吸收造成的影響就要用特殊的酶標(biāo)板。

2、酶標(biāo)板可以當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)板使用嗎？

酶標(biāo)板沒(méi)有進(jìn)行貼壁處理，是不可以用來(lái)培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的。

3、測(cè)吸光度可以用細(xì)胞培養(yǎng)板嗎？

細(xì)胞培養(yǎng)板可以進(jìn)行吸光度的檢測(cè)，經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量等。