內(nèi)毒素檢測（光度法）的原理及操作步驟
一，動態(tài)顯色法原理
革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素催化了LAL中酶原的活化 。初始活化速率由內(nèi)毒素的濃度決定�；罨蟮拿复呋藷o色底物 Ac-lle-Glu-Ala-Arg-pNA釋放出pNA。在整個(gè)孵育過程中，用光度法連續(xù)測量405nm處的游離pNA。通過將其反應(yīng)時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出樣品中的內(nèi)毒素濃度。
酶原 內(nèi)毒素 凝固酶
底物 + H2O 酶肽 肽 + pNA
二，動態(tài)濁度法原理
濁度法是通過檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化來檢測內(nèi)毒素含量的鱟試驗(yàn)法。動態(tài)濁度法是檢測反應(yīng)混合物的濁度到達(dá)某一預(yù)先設(shè)定的吸光度或透光率所需要的反應(yīng)時(shí)間，或是檢測濁度增加速度的方法。隨著凝膠的形成，反應(yīng)液吸光值的增加、OD值增加速率和內(nèi)毒素的濃度呈正相關(guān)。
三，光度法檢測所需主要設(shè)備、材料
試劑
– 鱟試劑（LAL）（Kinetic-QCL™ 或 PYROGENT™-5000 試劑）
– 內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品 (CSE)
– LAL溶解緩沖液（用于PYROGENT™-5000動態(tài)濁度法LAL 試驗(yàn)）
– LAL 試劑檢查用水（即LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)
器具
– 玻璃稀釋管(# N207)
– 獨(dú)立包裝的血清吸管（選購）
– 標(biāo)簽
– 96-微孔板 (# 25-340)
– 試劑槽(# 00190035)
請使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗(yàn)驗(yàn)證合格的無熱原器具。
設(shè)備和軟件
– 八道移液器
– 光吸收酶標(biāo)儀
– WinKQCL™軟件
– 移液器
– 計(jì)時(shí)器
– 漩渦混合器
四，操作步驟
本指南分步描述了如何進(jìn)行傳統(tǒng)動態(tài)法鱟試劑（以下簡稱LAL）試驗(yàn)。試驗(yàn)開始前，先使試劑瓶溫度與室溫相同。還應(yīng)打開孵育酶標(biāo)儀，并在WinKQCL軟件中創(chuàng)建微孔板模板。
五，注意事項(xiàng)
– 使用配套的LAL和 CSE 試劑
– 建議勿使用塑膠管稀釋內(nèi)毒素
– 遵循所有關(guān)于內(nèi)毒素漩渦震蕩次數(shù)的建議
– 使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗(yàn)驗(yàn)證合格的無熱原器具
– 使用前，先使試劑溫度與室溫保持相同
– 不要對LAL進(jìn)行漩渦震蕩
– 將試劑放入96-微孔板的孔中時(shí)，避免產(chǎn)生氣泡
– 不要污染樣品、標(biāo)準(zhǔn)品、LRW 和器具
– 應(yīng)正確安裝、驗(yàn)證并維護(hù)設(shè)備儀器
