免疫組化（IHC）和原位雜交技術(shù)（ISH）在癌癥中的不同應(yīng)用
免疫組織化學(xué)（IHC）是一種非常有價值的工具，用于檢測、定位和量化保存組織中的抗原，以達(dá)到研究和診斷的目的。這種方法因其方便、可靠和多功能性而被廣泛用于診斷和研究。在IHC中，抗原抗體復(fù)合物可通過熒光檢測顯現(xiàn)出來。不過，它們通常是通過光顯微鏡來觀察的，而不是使用顏色信號，這種方法被稱為顯色檢測。與免疫熒光技術(shù)相比，顯色I(xiàn)HC的優(yōu)勢在于通過蘇木精復(fù)染，特異抗原周圍的組織形態(tài)清晰可見。染色I(xiàn)HC標(biāo)記的結(jié)果以半定量方式報告，具有重要的診斷和預(yù)后意義，特別是在區(qū)分良性和惡性病變方面。
圖1. 小鼠抗CD44抗體（克隆號SFF-304）和兔抗Ki-67抗體（克隆號MIB-1）與MULTIVIEW® PLUS（mouse-HRP/rabbit-AP）試劑盒（ENZ-KIT181-0150，Enzo Life）配合使用，進(jìn)行多重免疫組化染色，蘇木精用作復(fù)染劑。
原位雜交
原位雜交（ISH）是一種獨(dú)特的分子分析方法，因?yàn)樗茉陲@微鏡下精確定位中期染色體涂片、細(xì)胞和組織中的DNA、mRNA和microRNA等核酸。1969年8月，兩個獨(dú)立的研究小組首次對該方法進(jìn)行了描述。原則上，ISH包括：(a)細(xì)胞或組織樣本的固定和預(yù)處理，以最佳方式保存目標(biāo)核酸；(b)標(biāo)記探針通過互補(bǔ)堿基配對與目標(biāo)雜交；最后，(c)檢測標(biāo)記，以便在顯微鏡下觀察雜交。與IHC相似，探針的檢測可通過顯色或熒光技術(shù)實(shí)現(xiàn)，分別稱為顯色原位雜交（ISH）或熒光原位雜交（FISH）。FISH已成為對可能最終導(dǎo)致癌癥發(fā)生的基因畸變進(jìn)行分子分析的一種特別強(qiáng)大的工具。
圖2. Nick Translation DNA Labeling System 2.0（ENZ-GEN111-0050，Enzo Life）用Orange 552 dUTP（ENZ-42842，Enzo Life）標(biāo)記TP53的BAC DNA 探針，用Green 496 dUTP（ENZ-42831，Enzo Life）標(biāo)記中心粒17的BAC DNA 探針。標(biāo)記的探針與中期染色體涂片雜交。(圖片來源于盧茲腫瘤大學(xué)研究所）
IHC在癌癥中的應(yīng)用
IHC 是一種利用單克隆和多克隆抗體檢測組織切片中特定抗原的方法，是癌癥研究人員和外科病理診斷醫(yī)師的一個非常強(qiáng)大的工具。通過IHC，可以確定相關(guān)抗原在健康和疾病狀態(tài)下的組織分布。IHC被廣泛應(yīng)用于癌癥研究和診斷，因?yàn)樘囟ǖ哪[瘤抗原只有在某些癌癥類型中才會重新表達(dá)或上調(diào)。因此，IHC在研究和病理學(xué)中發(fā)揮著重要作用，尤其是在腫瘤病理學(xué)、神經(jīng)病理學(xué)和血液病理學(xué)等亞專業(yè)領(lǐng)域。雖然組織的基本組織學(xué)檢查仍被認(rèn)為是有用和必要的步驟，但I(xiàn)HC能提供更多更詳細(xì)的見解。IHC可用于癌癥研究中的各種應(yīng)用，如腫瘤標(biāo)志物的鑒定和監(jiān)測、腫瘤診斷（尤其是來源不明的腫瘤）、腫瘤預(yù)后以及預(yù)測乳腺癌和前列腺癌的治療反應(yīng)。
圖3. 宮頸組織先用抗Ki-67抗體（小鼠）染色，然后用生物素偶聯(lián)的抗小鼠二抗染色，再用SAVIEW® PLUS HRP Reagent（ENZ-ACC102-0150，Enzo Life） 染色。
ISH在癌癥中的應(yīng)用
FISH是一種功能強(qiáng)大的技術(shù)，主要用于檢測染色體異常。FISH的靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測速度快，使其成為一項(xiàng)舉足輕重的細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，在血液惡性腫瘤和實(shí)體瘤的研究和診斷方面都取得了重大進(jìn)展。從醫(yī)學(xué)角度看，F(xiàn)ISH可用于檢測基因畸變，如基因融合、非整倍體或染色體缺失。它還可用于監(jiān)測畸變的進(jìn)展或鑒定新的致癌基因。現(xiàn)在，病毒感染在某些癌癥類型的發(fā)展中的重要性已被廣泛證實(shí)，ISH也為人類乳頭瘤病毒（HPV）感染相關(guān)癌癥的診斷和研究提供了一個強(qiáng)大的工具。Enzo Life于1986年開發(fā)出第一款用于ISH檢測的非放射性HPV探針，可用于監(jiān)測細(xì)胞和組織樣本中病毒載量。
圖4. 用PATHO-GENE® HPV 16/18/31/33/51（ENZ-32882，Enzo Life）篩查宮頸組織，然后用SAVIEW® PLUS HRP Reagent（ENZ-ACC102-0150，Enzo Life）進(jìn)行篩查。
