Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀在CAR-T療法中的應(yīng)用

隨著對(duì)腫瘤研究的不斷深入及治療技術(shù)的不斷發(fā)展，其臨床治療手段包含了傳統(tǒng)的手術(shù)、放療、化療，靶向治療和綜合治療，再到近些年的免疫治療，皆為了清除腫瘤、“治愈”癌癥。其中，在2012年成功治愈白血病女孩Emily的嵌合抗原受體T細(xì)胞（CAR-T）療法備受矚目。

嵌合抗原受體T細(xì)胞（CAR-T）療法，英文全稱Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，是一種治療腫瘤的精準(zhǔn)靶免疫療法，是一種極有前景的細(xì)胞免疫療法。
 

CAR-T療法通過(guò)基因工程技術(shù)將T細(xì)胞激活，給其裝上定位導(dǎo)航裝置CAR（腫瘤嵌合抗原受體），將T細(xì)胞改造成“超級(jí)戰(zhàn)士”，即CAR-T細(xì)胞，專門識(shí)別并高效消滅腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到治療惡性腫瘤的目的（圖1）。與傳統(tǒng)藥物或化療相比，CAR-T療法對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷更為精準(zhǔn)，在提高療效的同時(shí)大幅減輕了毒副作用，在臨床腫瘤治療，尤其是血液腫瘤的治療上取得了顯著效果。隨著研究的進(jìn)展，新靶點(diǎn)的不斷發(fā)現(xiàn)，CAR-T療法在實(shí)體瘤領(lǐng)域也有著卓越的進(jìn)步。

圖1. CAR-T療法原理示意圖

標(biāo)準(zhǔn)的CAR-T治療流程一般持續(xù)5周左右，主要分為7步：

 

CAR-T療法過(guò)程非常復(fù)雜和高端，涉及T細(xì)胞的篩選收集、基因改造、活化、培養(yǎng)、擴(kuò)增、修飾等，每一步都需要精心的設(shè)計(jì)和質(zhì)量控制，哪一步出現(xiàn)差錯(cuò)都會(huì)影響CAR-T療法。細(xì)胞的精確計(jì)數(shù)和體積的精準(zhǔn)測(cè)量對(duì)確保療法的成功起著至關(guān)重要的作用。

圖2. CAR-T療法的基本流程

1） 外周血單核細(xì)胞（PBMC）的采集

通常采用全自動(dòng)血細(xì)胞分離機(jī)從患者血液中分離采集PBMC，作為CAR-T細(xì)胞改造的起始原料。在此過(guò)程中，精確的細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞活率檢測(cè)對(duì)于確定細(xì)胞濃度和確保后續(xù)步驟有足夠數(shù)量的高質(zhì)量細(xì)胞至關(guān)重要。Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀采用庫(kù)爾特原理結(jié)合熒光流式檢測(cè)，提供精確的細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)和細(xì)胞活率檢測(cè)。
 

接下來(lái)進(jìn)一步用磁珠從PBMC中分離足夠的高質(zhì)量T細(xì)胞。此過(guò)程中，細(xì)胞的數(shù)量和細(xì)胞的純度非常重要。細(xì)胞數(shù)量影響后續(xù)制造過(guò)程中的計(jì)算和調(diào)整，而細(xì)胞純度會(huì)直接影響CAR-T終產(chǎn)品的質(zhì)量。比如，T細(xì)胞中混入B細(xì)胞雜質(zhì)，可能會(huì)導(dǎo)致病人對(duì)CAR-T療法產(chǎn)生抗性。Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀可在數(shù)秒內(nèi)完成給出細(xì)胞濃度和細(xì)胞大小分布結(jié)果，為產(chǎn)品評(píng)估提供數(shù)據(jù)支撐。

3） T細(xì)胞的激活、擴(kuò)增、轉(zhuǎn)導(dǎo)和CAR-T細(xì)胞的收獲

這一步是為了產(chǎn)生足夠多的CAR-T細(xì)胞用于治療。T細(xì)胞的激活窗口很短，監(jiān)測(cè)細(xì)胞何時(shí)準(zhǔn)備好十分關(guān)鍵，細(xì)胞體積是T細(xì)胞活化狀態(tài)的關(guān)鍵指標(biāo)。研究者通過(guò)監(jiān)測(cè)激活后的T細(xì)胞體積，可以比較不同激活方式的差異；通過(guò)監(jiān)測(cè)T細(xì)胞體積達(dá)到某一程度時(shí)再進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，可以更好地控制CAR基因的轉(zhuǎn)入時(shí)間，提高轉(zhuǎn)導(dǎo)成功率。Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀采用庫(kù)爾特原理對(duì)細(xì)胞大小和體積進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)需標(biāo)記，幾秒內(nèi)即可給出結(jié)果，隨時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞狀態(tài)。
 

準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)、活率測(cè)定也是這些過(guò)程所必須的，監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和活力，優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，對(duì)于確定CAR-T細(xì)胞產(chǎn)物的產(chǎn)量和生存能力至關(guān)重要。采用Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀可輕松實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)。
 

在CAR-T產(chǎn)品回輸之前，需要對(duì)其進(jìn)行全面嚴(yán)密的質(zhì)控，包括細(xì)胞活力、細(xì)胞濃度和細(xì)胞大小分布評(píng)估。細(xì)胞計(jì)數(shù)和大小測(cè)定是評(píng)估最終產(chǎn)品效力、純度和整體質(zhì)量的關(guān)鍵。細(xì)胞大小的偏差會(huì)影響其功能和效力。Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀可在數(shù)秒內(nèi)完成準(zhǔn)確的絕對(duì)計(jì)數(shù)和精準(zhǔn)的粒徑測(cè)量，可在CAR-T產(chǎn)品的質(zhì)控過(guò)程中發(fā)揮穩(wěn)定可靠的作用。
 

綜上可以看出，在整個(gè)CAR-T流程中，細(xì)胞計(jì)數(shù)和大小測(cè)定在監(jiān)測(cè)細(xì)胞群、優(yōu)化過(guò)程和確保CAR-T細(xì)胞療法的可靠一致性方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。準(zhǔn)確的細(xì)胞分析能夠優(yōu)化給藥、質(zhì)量控制，最終獲得更好的療效。Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀完美滿足以上CAR-T研究中所需的所有細(xì)胞分析需求。作為世界上唯一一款將庫(kù)爾特原理和雙熒光檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合的儀器，Moxi GO II可以在幾秒內(nèi)提供精確的細(xì)胞數(shù)量和體積數(shù)據(jù)（CV <3%），同時(shí)還可滿足基于熒光檢測(cè)的活率分析，GFP表達(dá)，表型分析等，集細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式應(yīng)用與一體，為研究者提供了極大的便利。

Moxi GO II快速流式細(xì)胞儀
 

Moxi GO II采用庫(kù)爾特原理進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和粒徑測(cè)量，同時(shí)采用488nm激光光源，結(jié)合兩個(gè)PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根據(jù)需要更換），進(jìn)行細(xì)胞活率、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規(guī)流式檢測(cè)。儀器設(shè)計(jì)小巧輕便，無(wú)需預(yù)熱，開機(jī)即用，預(yù)設(shè)程序，觸屏操控，運(yùn)行后10秒即可給出測(cè)試結(jié)果，使用后也無(wú)需清潔維護(hù)。無(wú)論是經(jīng)驗(yàn)豐富的流式專家，還是初試身手的實(shí)驗(yàn)小白，Moxi Go II都可以助您輕松完成實(shí)驗(yàn)。

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