全能核酸酶在病毒純化及生產(chǎn)中的應(yīng)用

全能核酸酶，又稱(chēng)非限制性核酸內(nèi)切酶，是一種主要來(lái)源于細(xì)菌Serratia Marcescens的非特異性核酸內(nèi)切酶，能夠降解各種形式的DNA和RNA，無(wú)論是雙鏈還是單鏈，線狀還是環(huán)狀，天然的還是經(jīng)過(guò)變性處理的。酶切產(chǎn)生的產(chǎn)物主要是2-5個(gè)堿基長(zhǎng)度的5'-單磷酸寡核苷酸，這是其特有的酶切特征。在實(shí)驗(yàn)研究和工業(yè)生產(chǎn)中都有廣泛的應(yīng)用。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，全能核酸酶的應(yīng)用領(lǐng)域還將不斷擴(kuò)大。全能核酸酶都是目前唯一能夠同時(shí)有效去除DNA和RNA的酶。

1、降低細(xì)胞/細(xì)菌裂解時(shí)核酸釋放產(chǎn)生的黏度，并且適用于任何裂解方式。

2、在大規(guī)模的層析純化時(shí)，避免由于大量的核酸吸附在層析介質(zhì)上降低蛋白質(zhì)的有效載量從而降低純化得率。

3、在 ELISA、二維電泳和免疫印跡分析中，提高分辨率和回收率。

4、消除重組蛋白、疫苗等生物制品的外源性核酸殘留。

病毒疫苗的生產(chǎn)、基因與細(xì)胞治療等產(chǎn)業(yè)均可能會(huì)用到病毒，這些產(chǎn)品的質(zhì)量控制對(duì)于保障這些產(chǎn)品的安全性和有效性具有重要意義。其中宿主DNA殘留可能會(huì)傳遞腫瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在的危險(xiǎn)性，各國(guó)藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)其殘留量有著嚴(yán)格的限度控制。

接下來(lái)小編帶您一起了解在病毒純化過(guò)程中如何正確使用全能核酸酶。

常見(jiàn)的病毒純化流程

我們可以選擇在收獲前、澄清后或是純化后用全能核酸酶處理樣品，一般選擇在收獲前或澄清后處理，可以提高病毒得率。

早期使用：可以減少大的DNA片段，并且可以在下游純化步驟中去除殘留的全能核酸酶。 但為了去除樣品中大量的核酸，必須使用大量的酶。

后期使用：節(jié)約全能核酸酶的用量，降低成本；但必須增加一個(gè)去除全能核酸酶殘留的步驟，并且，采用這種方式可能會(huì)導(dǎo)致病毒的得率減少。

全能核酸酶的活性受到多種因素的影響（溫度、pH、離子強(qiáng)度等），用量范圍從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此，不同的操作環(huán)境酶的最佳濃度不同，需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定。

五，應(yīng)用實(shí)例：

1.樣品：狂犬病毒濃縮液

處理?xiàng)l件:核酸酶濃度50~90U/ml ,

37 ℃處理 2 h,轉(zhuǎn)入18 ~ 26 ℃處理 6h

表 1.不同酶濃度對(duì)狂犬病病毒收獲液中 Vero 細(xì)胞 DNA 的去除效果【1】

2.樣品：狂犬病病毒濃縮液

處理?xiàng)l件：25、50和100 U/ml，37℃

表 2.不同濃度核酸酶作用不同時(shí)間去除 Vero 細(xì)胞 DNA 效果的比較【2】

3.樣品：流感病毒濃縮液

處理?xiàng)l件：10 U/mL，37℃

表 3.核酸酶處理 300k 超濾濃縮效果(x± s，n=3)【3】

參考文獻(xiàn)

[1] 崔燕平. 非限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)狂犬病疫苗中Vero細(xì)胞DNA的去除作用[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志, v.27(04):444-447.

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