蛋白標記定量的關(guān)鍵步驟與應(yīng)用

蛋白標記定量（Protein Labeling Quantification）是一種用于分析蛋白質(zhì)表達和調(diào)控的實驗技術(shù)，蛋白質(zhì)在實驗中會與特定的標記分子結(jié)合，旨在量化分析特定蛋白質(zhì)或多個蛋白質(zhì)在不同樣品中的表達水平。

蛋白標記定量的關(guān)鍵步驟通常包括：

1、蛋白質(zhì)提取：

首先從研究的生物樣本（如細胞、組織或體液）中提取蛋白質(zhì)。

2、蛋白質(zhì)標記：

將蛋白質(zhì)與化學(xué)標簽或同位素標簽結(jié)合。這些標簽可以是穩(wěn)定同位素標記（如SILAC）、同位素標記的氨基酸（如iTRAQ）或其他特定的化學(xué)標記物。這些標記允許研究人員在后續(xù)分析中區(qū)分和量化不同樣本中的相同蛋白質(zhì)。

圖1. 使用SILAC進行蛋白質(zhì)定量（Esthelle et al.,2019）

3、蛋白質(zhì)分離與鑒定：

通過液相色譜（LC）、二維凝膠電泳（2D-PAGE）等技術(shù)將蛋白質(zhì)分離。之后，通常使用質(zhì)譜（MS）技術(shù)對標記的蛋白質(zhì)進行鑒定和定量。

4、數(shù)據(jù)分析：

利用生物信息學(xué)工具對獲得的數(shù)據(jù)進行分析，比較不同樣本或處理條件下的蛋白質(zhì)表達差異。

圖2. SIALC與Dimethyl標記法對比

蛋白標記定量服務(wù)在生物醫(yī)學(xué)研究、藥物開發(fā)、疾病診斷等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，特別是在研究蛋白質(zhì)如何在不同條件下表達和調(diào)控方面。通過定量分析蛋白質(zhì)的表達，研究人員可以更好地了解疾病的機理，發(fā)現(xiàn)潛在的生物標記物，或評估藥物的效果。